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基因型檢測芯片試劑盒檢測原理
點擊次數(shù)：964 發(fā)布時間：2012-8-6
基因是脫氧核糖核酸（DNA）分子中含有特定遺傳信息的一段核苷酸序列，是遺傳物質的zui小功能單位。DNA結構中的單個堿基序列發(fā)生變異就構成了單核苷酸的多態(tài)性（SingleNucleotidePolymorphism,SNP）我們把包括SNP在內的不同基因結構稱為不同的基因型。不同的基因型可以幫助解釋不同的人種、人群、個體對疾病易感性的不同,以及對藥物的不同反應能力等，在對病人的個性化治療以及健康人的疾病預防上具有重大義！
基因型檢測芯片試劑盒就是根據(jù)不同基因的SNP信息，利用*的基因芯片技術而研制的。
檢測原理：基于生物樣本中基因靶序列與固定有基因探針的基因芯片進行特異性雜交，經過酶促顯色反應，給出待檢基因的SNP信息的方法。
一.芯片制造原理：芯片制造原理DNA探針（寡核苷酸片段，與被檢測的靶DNA互補）溶液與點樣緩沖液以1：1比例混合[點樣緩沖液可大大增加點樣效果的穩(wěn)定、提高檢測靈敏度]，通過點樣儀點到醛基基片上，然后用芯片活化液固定[芯片活化液可使醛基修飾載玻片上醛基的活性增強，提高氨基修飾基因探針的固定效率]。固定后DNA探針將與醛基玻片共價結合，形成陣列；完成芯片制作過程。
二.抽提原理：抽提原理
通過向樣本中加入抽提液，溫浴、離心等操作，使樣品中的細胞裂解，釋放出DNA；同時使蛋白變性沉淀，完成樣本DNA的抽提。DNA提取純化試劑盒提取的DNA可以直接用于PCR擴增，無需酚和氯仿抽提，無需乙醇沉淀，具有時間短、操作簡便、無毒無害的特點。
三.擴增液制造原理：擴增液制造原理
抽提獲得的染色體DNA濃度太小，直接進行雜交檢測無法獲得信號。將抽提獲得的染色體DNA作為模板，進行PCR擴增（同時對靶DNA進行標記），擴增產物的濃度足夠雜交檢測的需要。PCR的反應過程是將人工合成的兩條寡聚核苷酸引物（兩條短的DNA 片段）聚合酶和靶DNA經過一系列的升降溫循環(huán)來擴增DNA，、寡聚核苷酸引物雜交到靶DNA上，為聚合酶（Taq酶）提供了延伸起始位點，然后在兩個引物之間復制合成靶DNA序列。一個循環(huán)產生兩個復制模板，兩個循環(huán)產生四個復制模板，依次類推，PCR30循環(huán)就可以產生100萬個靶序列的復制模板。因此只需從樣本中抽提少量DNA,就可以進行基因芯片檢測。百傲公司的擴增液就是依據(jù)PCR擴增原理制造的。針對各待檢基因序列的SNP位點，設計20bp左右的上、下游引物用于擴增靶DNA，另外在引物一端連接*，用于顯色識別。擴增液包含了
上下游引物以及PCR反應所需的各種試劑（如dNTP、Mgcl2、H2O、Buffer等）Taq酶另管提供。將擴增液中加Taq酶、抽提好的靶DNA通過PCR反應將靶DNA 片段迅速擴大，用于雜交和顯色反應。
四.雜交顯色原理：雜交顯色原理
雜交原理：變性后的DNA擴增產物與基因芯片上探針進行特異性雜雜交原理交，就可以知道樣本DNA序列中SNP信息，即到底是屬于野生型還是突變型，是雜合子還是純合子?；蛐酒s交反應是通過靶DNA與探針的互補堿基之間形成氫鍵而恢復成原來的雙螺旋結構原理進行的。在雜交反應中，序列組成、靶標DNA分子和探針的長度、雜交溫度、鹽等均會影響雜交效率和強度。顯色原理：采用Biotin標記的堿性磷酸酶（AP）催化的顯色原理NBT/BCIP顯色反應的檢測方法。首先，與檢測探針雜交的擴增產物上的Biotin先與鏈親和素堿性磷酸酶復合物（Stripavitin-AP）反應，生成新的復合物：Biotin-Stripavitin-AP，后者發(fā)生如下的顯色反應：Biotin-Stripavitin-AP+BCI-P→BCI-OH+PiBCI-OH+NBT→藍紫色沉淀其中，BCIP為5溴-4氯-3吲哚磷酸；NBT為硝基四氮唑藍。我公司自主研發(fā)的一系列用于雜交和顯色的溶液（包括預雜交液、雜交緩沖液、洗液
1、洗液
2、洗液
3、抗體液和顯色液）質量穩(wěn)定，能有效提高基因芯片雜交反應和顯色反應，排除非特異性雜交。
五.檢測原理：檢測原理（pH7.5）
采用CCD（ChargeCoupledDevice即電荷耦合器件）原理，將芯片上的色斑經信號放大，用BE-2.0基因圖象分析軟件（軟件登記號：2002SR3064）進行分析，給出靶基因SNP信息。