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銀染核仁形成區(qū)與近端著絲粒染色體隨體聯合

時間:2017-4-5閱讀:1229
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【實驗原理】
人類近端著絲粒染色體的副縊痕與核仁形成有關,故稱為核仁形成區(qū)(NOR)。當位于此處的18S、28S核糖體RNA的基因(rDNA)具有轉錄活性時,應用銀染技術可使NOR特異性著色(褐黑色)。進一步證明銀染物質不是rDNA,亦不是rRNA,可能是核仁形成區(qū)特異的蛋白質,即和rRNA轉錄相的酸性蛋白。人類核糖體RNA基因位于5對近端著絲點染色體短臂的次猛痕處,即人類的核仁形成區(qū)。在正常人中, 不是所有核仁形成區(qū)均被銀染,其范圍大約4-10。應用銀染法可以覺察正常人體核糖體RNA基因的活動。此外,人類近端著絲粒染色體的隨體間易發(fā)生聯合,應用銀染技術可在發(fā)生聯合的染色體間清楚地看到銀染物質相連。因此,應用銀染核仁形成區(qū)(Ag-NOR)與近端著絲粒染色體隨體聯合(Ag-AA)技術,可以分析有活性的rRNA基因的動態(tài)變化。正常人Ag-NOR平均為5.8/細胞。

【實驗用品】
1. 恒溫水浴箱、顯微鏡、平皿、牙簽、擦鏡紙、鑷子;
2. 預制染色體玻片標本、0.1%甲酸、AgNO3(50%)。1:20 Giemsa,5mol/L HCl。

【實驗步驟】
1. 按半微量法采取外周靜脈血,接種培養(yǎng)。常規(guī)法制片。將染色體玻片標本在室溫下放置2~3天。
2. 將標本置入5mol/L HCl溶液中常溫處理5分鐘,蒸餾水沖洗2-3次,甩干。
3. 將500mg AgNO3溶于1 ml 0.1%甲酸溶液中,混勻后立即滴4~5(5ml)滴至玻片標本上。
4. 在平皿中平行放置兩根牙簽,將玻片標本放在牙簽上。
5. 在標本上蓋一張比玻片稍小的擦鏡紙,用鑷子掀動紙片數次,使染液均勻分散在標本上。
6. 將平皿置于60℃水浴箱中處理3-5分鐘,直至擦鏡紙呈棕黃色終止反應。
7. 蒸餾水沖洗去擦鏡紙,以1:20 Giemsa染液復染3分鐘。水洗,氣干。
8. 鏡下觀察。

【實驗結果與分析】
1. Ag-NOR的計數:選擇銀染著色清晰的分裂相,計數6個D組(13、14、和15號染色體)和4個G組(21和22號染色體)近端著絲粒染色體,不論單側或雙側的銀染點都計數為一個有銀染的染色體。
2. Ag-AA計數:凡近端著絲粒染色體之間有銀染物質相連的,均計數為Ag-AA。涉及2條近端著絲粒染色體的聯合,記為1個Ag-AA;涉及3條近端著絲粒染色體的聯合,如未形成閉環(huán)的,記為2個Ag-AA;3條染色體聯合形成閉環(huán)時,記為3個Ag-AA;依此類推。
銀染核仁形成區(qū)與近端著絲粒染色體隨體聯合

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