原理： 
轉(zhuǎn)化(Transformation)：將外源DNA分子引入受體細(xì)菌，使之獲得新的遺傳性狀。 
受體細(xì)菌一般是限制修飾系統(tǒng)缺陷的變異株，不含限制性內(nèi)切酶和甲基化酶的突變體(R-,M-)，可以容忍外源DNA分子進(jìn)入體內(nèi)并穩(wěn)定地遺傳給后代。受體細(xì)胞經(jīng)過一些特殊方法，如電擊或CaCl2、RbCl/KCl等化學(xué)試劑的處理后,細(xì)胞膜的通透性增高，成為感受態(tài)細(xì)胞(Compenent cells)，使外源DNA分子得以進(jìn)入。 
目前常用的感受態(tài)細(xì)胞制備方法有CaCl2和RbCl/KCl法，RbCl/KCl法制備的感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化效率較高，但CaCl2法簡便易行，且其轉(zhuǎn)化效率*可以滿足一般實(shí)驗(yàn)的要求，制備出的感受態(tài)細(xì)胞暫時(shí)不用時(shí)，可加入無菌甘油至總體積15％，于-70℃保存半年之久，因此CaCl2法為使用更廣泛。 

準(zhǔn)備： 
1、配制0.05mol/L CaCl2-15%甘油混合溶液，高溫高壓滅菌； 
注：CaCl2必須為分析純以上。 
2、實(shí)驗(yàn)中所需的所有試管、培養(yǎng)瓶、離心管等均要用去離子水*清洗干凈，高溫高壓滅菌； 
注：有制備感受態(tài)細(xì)菌的一套實(shí)驗(yàn)器材。 
3、受體菌的培養(yǎng)：從非選擇性LB平板上挑取E.coli單菌落,接種于3-5ml LB液體培養(yǎng)基中，37℃振蕩培養(yǎng)過夜至對數(shù)生長中后期。將該菌懸液以1:100的比例接種于50~100ml LB液體培養(yǎng)基中,37℃振蕩培養(yǎng)2.5小時(shí)至OD600=0.5。注：培養(yǎng)時(shí)間不宜超過2.5小時(shí)，否則不能達(dá)到zui高轉(zhuǎn)化效率。 

實(shí)驗(yàn)步驟： 
1、細(xì)菌的收獲：培養(yǎng)液冰浴5分鐘后，4℃5000g離心5分鐘。 
注：（1）冰浴時(shí)間不要超過10分鐘；（2）或者4℃8000g離心2分鐘，速度太快或時(shí)間太長對細(xì)菌狀態(tài)不利，并且不利于下步洗滌。（3）若出現(xiàn)很多黑色沉淀（細(xì)菌碎片），說明有多量細(xì)菌死亡，此時(shí)細(xì)菌狀態(tài)并不好，但若只有少量黑色沉淀，或?qū)D(zhuǎn)化效率要求不高，亦可繼續(xù)進(jìn)行。 
2、用預(yù)冷的去離子水洗滌沉淀，4℃5000g離心5分鐘。 
注：（1）洗去細(xì)菌碎片和殘留的培養(yǎng)液；（2）洗滌時(shí)間宜短不宜長。 
3、沉淀加入2ml預(yù)冷的0.05mol/L CaCl2-15%甘油混合溶液，輕吹散，冰浴5分鐘，4℃5000g離心5分鐘。 
注：此時(shí)可見細(xì)菌沉淀為白色，體積也脹大為zui初沉淀體積的數(shù)倍。 
4、沉淀加入2ml預(yù)冷的0.05mol/L CaCl2-15%甘油混合溶液，輕吹散，即成為感受態(tài)細(xì)胞懸液。分裝成50~100μl的小份，貯存于-70℃可保存半年。 
注：（1）在2月之內(nèi)用完，然后重新制備；（2）若要進(jìn)一步提高轉(zhuǎn)化效率，可將加入的溶液體積減少到1ml，或分裝為200μl/管。 

說明： 
1、我本人在對比了數(shù)種CaCl2法制備感受態(tài)細(xì)胞的方法之后，確定此方案是轉(zhuǎn)化效率zui高且zui簡易的方案,其轉(zhuǎn)化效率只比電轉(zhuǎn)化相錯(cuò)1~2個(gè)數(shù)量級。 
2、盡量在超靜工作臺內(nèi)操作。 
3、本方案用于DH5α、JM109、XL-10、BL-21等系列E.coli，其它的菌種尚未試用。