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標(biāo)準(zhǔn)品
培養(yǎng)基
培養(yǎng)基原料 霍亂弧菌診斷血清 大腸艾希氏菌診斷血清 志賀氏菌屬診斷血清 沙門氏菌屬診斷血清 標(biāo)準(zhǔn)血清,診斷血清 抗生素藥敏紙片 微生物配套試劑 微生物生化管 管裝培養(yǎng)基 即用型液體培養(yǎng)基 一次性培養(yǎng)基平板 顯色培養(yǎng)基 臨床培養(yǎng)基 菌種保存培養(yǎng)基 四環(huán)素檢定、厭氧亞硫酸鹽還原桿菌檢測(cè)培養(yǎng)基 維生素檢測(cè)培養(yǎng)基 一次性衛(wèi)生用品衛(wèi)生檢測(cè)培養(yǎng)基 罐頭食品商業(yè)無(wú)菌檢測(cè)培養(yǎng)基 飲用水及水源檢測(cè)培養(yǎng)基 藥品、生物制品檢測(cè)培養(yǎng)基 化妝品檢測(cè)培養(yǎng)基 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基 啤酒檢驗(yàn)培養(yǎng)基 軍團(tuán)菌檢測(cè)培養(yǎng)基 支原體檢測(cè)培養(yǎng)基 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 彎曲桿菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌、厭氧菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 阪崎腸桿菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 溶血性鏈球菌檢測(cè)培養(yǎng)基 李斯特氏菌檢測(cè)培養(yǎng)基 弧菌檢測(cè)培養(yǎng)基 乳酸菌、雙歧桿菌檢測(cè)培養(yǎng)基 酵母、霉菌檢測(cè)培養(yǎng)基 檢測(cè)培養(yǎng)基 沙門氏菌、志賀氏菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 大腸菌群、糞大腸菌群、大腸桿菌及腸桿菌科檢測(cè)培養(yǎng)基 細(xì)菌總數(shù)檢測(cè),增菌培養(yǎng)基
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電泳技術(shù)發(fā)展簡(jiǎn)史

時(shí)間:2015-6-9閱讀:594
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簡(jiǎn)介 
1809年俄國(guó)物理學(xué)家Рейсе發(fā)現(xiàn)電泳現(xiàn)象。他在濕粘土中插上帶玻璃管的正負(fù)兩個(gè)電極,加電壓后發(fā)現(xiàn)正極玻璃管中原有的水層變混濁,即帶負(fù)電荷的粘土顆粒向正極移動(dòng),這就是電泳現(xiàn)象。


1909年Michaelis將膠體離子在電場(chǎng)中的移動(dòng)稱為電泳。他用不同pH的溶液在U形管中測(cè)定了轉(zhuǎn)化酶和過(guò)氧化氫酶的電泳移動(dòng)和等電點(diǎn)。


1937年瑞典Uppsala大學(xué)的Tiselius對(duì)電泳儀器作了改進(jìn),創(chuàng)造了Tiselius電泳儀,建立了研究蛋白質(zhì)的移動(dòng)界面電泳方法,并證明了血清是由白蛋白及α、β、γ球蛋白組成的,由于Tiselius在電泳技術(shù)方面作出的開(kāi)拓性貢獻(xiàn)而獲得了1948年的諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)。


1948年Wieland和Fischer重新發(fā)展了以濾紙作為支持介質(zhì)的電泳方法,對(duì)氨基酸的分離進(jìn)行過(guò)研究。


從本世紀(jì)50年代起,特別是1950年Durrum用紙電泳進(jìn)行了各種蛋白質(zhì)的分離以后,開(kāi)創(chuàng)了利用各種固體物質(zhì)(如各種濾紙、醋酸纖維素薄膜、瓊脂凝膠、淀粉凝膠等)作為支持介質(zhì)的區(qū)帶電泳方法。


1959年Raymond和Weintraub利用人工合成的凝膠作為支持介質(zhì),創(chuàng)建了聚丙烯酰胺凝膠電泳,地提高了電泳技術(shù)的分辨率,開(kāi)創(chuàng)了近代電泳的新時(shí)代。30多年來(lái),聚丙烯酰胺凝膠電泳仍是生物化學(xué)和分子生物學(xué)中對(duì)蛋白質(zhì)、多肽、核酸等生物大分子使用zui普遍,分辨率zui高的分析鑒定技術(shù),是檢驗(yàn)生化物質(zhì)的zui高純度:即“電泳純"(一維電泳一條帶或二維電泳一個(gè)點(diǎn))的標(biāo)準(zhǔn)分析鑒定方法,至今仍被人們稱為是對(duì)生物大分子進(jìn)行分析鑒定的zui后、zui準(zhǔn)確的手段,即“LastCheck"。


由80年代發(fā)展起來(lái)的新的毛細(xì)管電泳技術(shù),是化學(xué)和生化分析鑒定技術(shù)的重要新發(fā)展,己受到人們的充分重視。


電泳的基本原理

電泳是指帶電顆粒在電場(chǎng)的作用下發(fā)生遷移的過(guò)程。許多重要的生物分子,如氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、核苷酸、核酸等都具有可電離基團(tuán),它們?cè)谀硞€(gè)特定的pH值下可以帶正電或負(fù)電,在電場(chǎng)的作用下,這些帶電分子會(huì)向著與其所帶電荷極性相反的電極方向移動(dòng)。

電泳技術(shù)就是利用在電場(chǎng)的作用下,由于待分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)以及分子本身大小、形狀等性質(zhì)的差異,使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度,從而對(duì)樣品進(jìn)行分離、鑒定或提純的技術(shù)。

電泳過(guò)程必須在一種支持介質(zhì)中進(jìn)行。Tiselius等在1937年進(jìn)行的自由界面電泳沒(méi)有固定支持介質(zhì),所以擴(kuò)散和對(duì)流都比較強(qiáng),影響分離效果。于是出現(xiàn)了固定支持介質(zhì)的電泳,樣品在固定的介質(zhì)中進(jìn)行電泳過(guò)程,減少了擴(kuò)散和對(duì)流等干擾作用。zui初的支持介質(zhì)是濾紙和醋酸纖維素膜,目前這些介質(zhì)在實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)應(yīng)用得較少。

在很長(zhǎng)一段時(shí)間里,小分子物質(zhì)如氨基酸、多肽、糖等通常用濾紙或纖維素、硅膠薄層平板為介質(zhì)的電泳進(jìn)行分離、分析,但目前則一般使用更靈敏的技術(shù)如HPLC等來(lái)進(jìn)行分析。這些介質(zhì)適合于分離小分子物質(zhì),操作簡(jiǎn)單、方便。

但對(duì)于復(fù)雜的生物大分子則分離效果較差。凝膠作為支持介質(zhì)的引入大大促進(jìn)了電泳技術(shù)的發(fā)展,使電泳技術(shù)成為分析蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子的重要手段之一。zui初使用的凝膠是淀粉凝膠,但目前使用得zui多的是瓊脂糖凝膠和聚丙烯酰胺凝膠。蛋白質(zhì)電泳主要使用聚丙烯酰胺凝膠。


電泳裝置主要包括兩個(gè)部分:電源和電泳槽。電源提供直流電,在電泳槽中產(chǎn)生電場(chǎng),驅(qū)動(dòng)帶電分子的遷移。電泳槽可以分為水平式和垂直式兩類。垂直板式電泳是較為常見(jiàn)的一種,常用于聚丙烯酰胺凝膠電泳中蛋白質(zhì)的分離。

電泳槽中間是夾在一起的兩塊玻璃板,玻璃板兩邊由塑料條隔開(kāi),在玻璃平板中間制備電泳凝膠,凝膠的大小通常是12 cm~14 cm,厚度為1 mm~2 mm,近年來(lái)新研制的電泳槽,膠面更小、更薄,以節(jié)省試劑和縮短電泳時(shí)間。

制膠時(shí)在凝膠溶液中放一個(gè)塑料梳子,在膠聚合后移去,形成上樣品的凹槽。水平式電泳,凝膠鋪在水平的玻璃或塑料板上,用一薄層濕濾紙連接凝膠和電泳緩沖液,或?qū)⒛z直接浸入緩沖液中。由于pH值的改變會(huì)引起帶電分子電荷的改變,進(jìn)而影響其電泳遷移的速度,所以電泳過(guò)程應(yīng)在適當(dāng)?shù)木彌_液中進(jìn)行的,緩沖液可以保持待分離物的帶電性質(zhì)的穩(wěn)定。

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