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中級會(huì)員 | 第14年

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標(biāo)準(zhǔn)品
培養(yǎng)基
培養(yǎng)基原料 霍亂弧菌診斷血清 大腸艾希氏菌診斷血清 志賀氏菌屬診斷血清 沙門氏菌屬診斷血清 標(biāo)準(zhǔn)血清,診斷血清 抗生素藥敏紙片 微生物配套試劑 微生物生化管 管裝培養(yǎng)基 即用型液體培養(yǎng)基 一次性培養(yǎng)基平板 顯色培養(yǎng)基 臨床培養(yǎng)基 菌種保存培養(yǎng)基 四環(huán)素檢定、厭氧亞硫酸鹽還原桿菌檢測培養(yǎng)基 維生素檢測培養(yǎng)基 一次性衛(wèi)生用品衛(wèi)生檢測培養(yǎng)基 罐頭食品商業(yè)無菌檢測培養(yǎng)基 飲用水及水源檢測培養(yǎng)基 藥品、生物制品檢測培養(yǎng)基 化妝品檢測培養(yǎng)基 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基 啤酒檢驗(yàn)培養(yǎng)基 軍團(tuán)菌檢測培養(yǎng)基 支原體檢測培養(yǎng)基 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 彎曲桿菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌、厭氧菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 阪崎腸桿菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 溶血性鏈球菌檢測培養(yǎng)基 李斯特氏菌檢測培養(yǎng)基 弧菌檢測培養(yǎng)基 乳酸菌、雙歧桿菌檢測培養(yǎng)基 酵母、霉菌檢測培養(yǎng)基 檢測培養(yǎng)基 沙門氏菌、志賀氏菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 大腸菌群、糞大腸菌群、大腸桿菌及腸桿菌科檢測培養(yǎng)基 細(xì)菌總數(shù)檢測,增菌培養(yǎng)基
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蛋白質(zhì)組學(xué)及研究技術(shù)路線

時(shí)間:2015-3-17閱讀:649
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基因組(genome)包含的遺傳信息經(jīng)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生mRNA,一個(gè)細(xì)胞在特定生理或病理狀態(tài)下表達(dá)的所有種類的mRNA稱為轉(zhuǎn)錄子組(transcriptome)。很顯然,不同細(xì)胞在不同生理或病理狀態(tài)下轉(zhuǎn)錄子組包含的mRNA的種類不盡相同。mRNA經(jīng)翻譯產(chǎn)生蛋白質(zhì),一個(gè)細(xì)胞在特定生理或病理狀態(tài)下表達(dá)的所有種類的蛋白質(zhì)稱為蛋白質(zhì)組(proteome)。同理,不同細(xì)胞在不同生理或病理狀態(tài)下所表達(dá)的蛋白質(zhì)的種類也不盡相同。蛋白質(zhì)是基因功能的實(shí)施者,因此對蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu),定位和蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的研究將為闡明生命現(xiàn)象的本質(zhì)提供直接的基礎(chǔ)。

生命科學(xué)是實(shí)驗(yàn)科學(xué),因此生命科學(xué)的發(fā)展地依賴于實(shí)驗(yàn)技術(shù)的發(fā)展。以DNA序列分析技術(shù)為核心的基因組研究技術(shù)推動(dòng)了基因組研究的日新月異,而以基因芯片技術(shù)為代表的基因表達(dá)研究技術(shù)為科學(xué)家了解基因表達(dá)規(guī)律立下汗馬功勞。在蛋白質(zhì)組研究中,二維電泳和質(zhì)譜技術(shù)的黃金組合又為科學(xué)家掌握蛋白質(zhì)表達(dá)規(guī)律再鑄輝煌。蛋白質(zhì)組學(xué)(proteomics)就是指研究蛋白質(zhì)組的技術(shù)及這些研究得到的結(jié)果。

蛋白質(zhì)組學(xué)的研究試圖比較細(xì)胞在不同生理或病理?xiàng)l件下蛋白質(zhì)表達(dá)的異同,對相關(guān)蛋白質(zhì)進(jìn)行分類和鑒定。更重要的是蛋白質(zhì)組學(xué)的研究要分析蛋白質(zhì)間相互作用和蛋白質(zhì)的功能。

蛋白質(zhì)組學(xué)的研究內(nèi)容包括:

1.蛋白質(zhì)鑒定:可以利用一維電泳和二維電泳并結(jié)合Western等技術(shù),利用蛋白質(zhì)芯片和抗體芯片及免疫共沉淀等技術(shù)對蛋白質(zhì)進(jìn)行鑒定研究。

2.翻譯后修飾:很多mRNA表達(dá)產(chǎn)生的蛋白質(zhì)要經(jīng)歷翻譯后修飾如磷酸化,糖基化,酶原激活等。翻譯后修飾是蛋白質(zhì)調(diào)節(jié)功能的重要方式,因此對蛋白質(zhì)翻譯后修飾的研究對闡明蛋白質(zhì)的功能具有重要作用。

3.蛋白質(zhì)功能確定:如分析酶活性和確定酶底物,細(xì)胞因子的生物分析/配基-受體結(jié)合分析??梢岳没蚯贸头戳x技術(shù)分析基因表達(dá)產(chǎn)物-蛋白質(zhì)的功能。另外對蛋白質(zhì)表達(dá)出來后在細(xì)胞內(nèi)的定位研究也在一定程度上有助于蛋白質(zhì)功能的了解。Clontech的熒光蛋白表達(dá)系統(tǒng)就是研究蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)定位的一個(gè)很好的工具。

4.對人類而言,蛋白質(zhì)組學(xué)的研究zui終要服務(wù)于人類的健康,主要指促進(jìn)分子醫(yī)學(xué)的發(fā)展。如尋找藥物的靶分子。很多藥物本身就是蛋白質(zhì),而很多藥物的靶分子也是蛋白質(zhì)。藥物也可以干預(yù)蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用。

在基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和疾病機(jī)理研究中,了解人不同發(fā)育、生和不同生理、病理?xiàng)l件下及不同細(xì)胞類型的基因表達(dá)的特點(diǎn)具有特別重要的意義。這些研究可能找到直接與特定生理或病理狀態(tài)相關(guān)的分子,進(jìn)一步為設(shè)計(jì)作用于特定靶分子的藥物奠定基礎(chǔ)。

不同發(fā)育、生和不同生理、病理?xiàng)l件下不同的細(xì)胞類型的基因表達(dá)是不一致的,因此對蛋白質(zhì)表達(dá)的研究應(yīng)該到細(xì)胞甚至亞細(xì)胞水平??梢岳妹庖呓M織化學(xué)技術(shù)達(dá)到這個(gè)目的,但該技術(shù)的致命缺點(diǎn)是通量低。LCM技術(shù)可以地從組織切片中取出研究者感興趣的細(xì)胞類型,因此LCM技術(shù)實(shí)際上是一種原位技術(shù)。取出的細(xì)胞用于蛋白質(zhì)樣品的制備,結(jié)合抗體芯片或二維電泳-質(zhì)譜的技術(shù)路線,可以對蛋白質(zhì)的表達(dá)進(jìn)行原位的高通量的研究。很多研究采用勻漿組織制備蛋白質(zhì)樣品的技術(shù)路線,其研究結(jié)論值得懷疑,因?yàn)榻M織勻漿后不同細(xì)胞類型的蛋白質(zhì)混雜在一起,zui后得到的研究數(shù)據(jù)根本無法解釋蛋白質(zhì)在每類細(xì)胞中的表達(dá)情況。雖然培養(yǎng)細(xì)胞可以得到單一類型細(xì)胞,但體外培養(yǎng)的細(xì)胞很難模擬體內(nèi)細(xì)胞的環(huán)境,因此這樣研究得出的結(jié)論也很難用于解釋在體實(shí)際情況。因此在研究中首先應(yīng)該將不同細(xì)胞類型分離,分離出來的不同類型細(xì)胞可以用于基因表達(dá)研究,包括mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)。LCM技術(shù)獲得的細(xì)胞可以用于蛋白質(zhì)樣品的制備??梢愿鶕?jù)需要制備總蛋白,或膜蛋白,或核蛋白等,也可以富集糖蛋白,或通過去除白蛋白來減少蛋白質(zhì)類型的復(fù)雜程度。相關(guān)試劑盒均有廠商提供。

蛋白質(zhì)樣品中的不同類型的蛋白質(zhì)可以通過二維電泳進(jìn)行分離。二維電泳可以將不同種類的蛋白質(zhì)按照等電點(diǎn)和分子量差異進(jìn)行高分辨率的分離。成功的二維電泳可以將2000到3000種蛋白質(zhì)進(jìn)行分離。電泳后對膠進(jìn)行高靈敏度的染色如銀染和熒光染色。如果是比較兩種樣品之間蛋白質(zhì)表達(dá)的異同,可以在同樣條件下分別制備二者的蛋白質(zhì)樣品,然后在同樣條件下進(jìn)行二維電泳,染色后比較兩塊膠。也可以將二者的蛋白質(zhì)樣品分別用不同的熒光染料標(biāo)記,然后兩種蛋白質(zhì)樣品在一塊膠上進(jìn)行二維電泳的分離,zui后通過熒光掃描技術(shù)分析結(jié)果。

膠染色后可以利用凝膠圖象分析系統(tǒng)成像,然后通過分析軟件對蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行定量分析,并且對感興趣的蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行定位。通過專門的蛋白質(zhì)點(diǎn)切割系統(tǒng),可以將蛋白質(zhì)點(diǎn)所在的膠區(qū)域進(jìn)行切割。接著對膠中蛋白質(zhì)進(jìn)行酶切消化,酶切后的消化物經(jīng)脫鹽/濃縮處理后就可以通過點(diǎn)樣系統(tǒng)將蛋白質(zhì)點(diǎn)樣到特定的材料的表面(MALDI-TOF)。zui后這些蛋白質(zhì)就可以在質(zhì)譜系統(tǒng)中進(jìn)行分析,從而得到蛋白質(zhì)的定性數(shù)據(jù);這些數(shù)據(jù)可以用于構(gòu)建數(shù)據(jù)庫或和已有的數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比較分析。實(shí)際上像人類的血漿,尿液,腦脊液,乳腺,心臟,膀胱癌和磷狀細(xì)胞癌及多種病原微生物的蛋白質(zhì)樣品的二維電泳數(shù)據(jù)庫已經(jīng)建立起來,研究者可以登錄www.expasy.ch/www/tools.html等進(jìn)行查詢,并和自己的同類研究進(jìn)行對比分析。

Genomic Solution可以為研究者提供除質(zhì)譜外的所有蛋白質(zhì)組學(xué)研究工具,包括二維電泳系統(tǒng),成像系統(tǒng)及分析軟件,膠切割系統(tǒng),蛋白質(zhì)消化濃縮工作站,點(diǎn)樣工作站等;同時(shí)還可以提供相關(guān)試劑和消耗品。

LCM-二維電泳-質(zhì)譜的技術(shù)路線是典型的一條蛋白質(zhì)組學(xué)研究的技術(shù)路線,除此以外,LCM-抗體芯片也是一條重要的蛋白質(zhì)組學(xué)研究的技術(shù)路線。即通過LCM技術(shù)獲得感興趣的細(xì)胞類型,制備細(xì)胞蛋白質(zhì)樣品,蛋白質(zhì)經(jīng)熒光染料標(biāo)記后和抗體芯片雜交,從而可以比較兩種樣品蛋白質(zhì)表達(dá)的異同。Clontechzui近開發(fā)了一張抗體芯片,可以對378種膜蛋白和胞漿蛋白進(jìn)行分析。該芯片同時(shí)配合了抗體芯片的全部操作過程的重要試劑,包括蛋白質(zhì)制備試劑,蛋白質(zhì)的熒光染料標(biāo)記試劑,標(biāo)記體系的純化試劑,雜交試劑等。

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