1）二倍體細(xì)胞培養(yǎng)法 
二倍體細(xì)胞培養(yǎng)法與一般培養(yǎng)相同，關(guān)鍵在于傳代，其傳代程序?yàn)椋?nbsp;
1.吸除舊培養(yǎng)液注入另瓶中。 
2.用溫BSS沖洗1次。 
3.用0.25%溫消化，加入消化液量以僅覆蓋細(xì)胞層即可；作用1~5分鐘。 
4.待細(xì)胞附著松動(dòng)、細(xì)胞質(zhì)邊緣卷起和間隔加大，便終止消化。為防止細(xì)胞丟失，可不必再用BSS沖洗，直接向瓶中加入培養(yǎng)液（新舊培養(yǎng)液按2：1新舊混合）。 
5.輕輕反復(fù)吹打制成單個(gè)細(xì)胞懸液。 
6.按一分為二比例接種培養(yǎng)。 

2）支持物培養(yǎng)法 
加支持物培養(yǎng)法與一般培養(yǎng)法相同，只是在培養(yǎng)前需在培養(yǎng)瓶中加入已經(jīng)消毒的支持物。 
1.支持物制備：如用特氟隆薄膜，無(wú)菌條件下啟封，用剪刀按需要剪成各種不同大小的塊，于培養(yǎng)接種細(xì)胞前，先置入培養(yǎng)容器中即可；通常多用蓋玻片做支持物，用前先要把蓋片用玻璃刀切成一定形態(tài)，以便裝入培養(yǎng)瓶中，然后按如下順序處理：自來(lái)水浸泡24小時(shí)—96%酒精30～60 min—蒸餾水浸泡30～60 min—用干凈軟布擦拭干凈—裝入培養(yǎng)皿中—高壓或干熱滅菌備用。 
2.培養(yǎng)法：初代消化培養(yǎng)、初代組織塊培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)等皆可應(yīng)用加支持物培養(yǎng)法。接種細(xì)胞后，可在任何時(shí)間取出支持物，做各種觀察或?qū)嶒?yàn)。 

3）細(xì)胞分離（克?。┡囵B(yǎng) 
多孔塑料培養(yǎng)板單細(xì)胞克隆法： 
1. 消化：取健康待克隆細(xì)胞，吸出瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)液，加消化液。 
2. 低密度細(xì)胞懸液的制備：做克隆細(xì)胞時(shí)首先需先用消化法制備出分散成單個(gè)細(xì)胞懸液，然后稀釋細(xì)胞，使之成為1~2細(xì)胞/毫升懸液，zui適宜細(xì)胞密度為1~2細(xì)胞/ml培養(yǎng)液。 
3. 接種：先用吸管輕輕吹打細(xì)胞懸液，使混懸均勻，繼用加樣器向塑料培養(yǎng)板每孔內(nèi)加0.5毫升。接種時(shí)要迅速準(zhǔn)確，爭(zhēng)取在zui短時(shí)間內(nèi)加完，以免培養(yǎng)液蒸發(fā)，然后迅速蓋好蓋板，置CO2溫箱培養(yǎng)。 
4. 標(biāo)記：培養(yǎng)6~12小時(shí)后，待細(xì)胞下沉冰貼附于培養(yǎng)板孔底后，從溫箱中取出，置倒置光顯微鏡臺(tái)上，觀察和標(biāo)記下含有單個(gè)細(xì)胞的孔，置CO2溫箱培養(yǎng)。在培養(yǎng)中一般無(wú)需換液，只有在細(xì)胞增長(zhǎng)過于緩慢時(shí)才可進(jìn)行換液。換液時(shí)先吸除舊培養(yǎng)基，但不要吸除過多，余少許，以免細(xì)胞干涸。然后再迅速補(bǔ)加新鮮克隆培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)3~4周。待孔內(nèi)細(xì)胞增至500~600個(gè)時(shí)，可進(jìn)行分離培養(yǎng)。 
5. 分離擴(kuò)大培養(yǎng)：培養(yǎng)86~96小時(shí)后進(jìn)行觀察。挑選生長(zhǎng)良好的單細(xì)胞克隆孔，先吸除舊培養(yǎng)液，用Hanks洗1~2次，繼加少許，加入量已能覆蓋細(xì)胞群即可，如過多，應(yīng)吸除多余消化液。置于倒置顯微鏡下窺視，待發(fā)現(xiàn)細(xì)胞變圓時(shí)，加入0.1ml含10%血清的克隆培養(yǎng)基，用吸管輕輕吹打，當(dāng)細(xì)胞離開底物懸浮后，一并吸入管內(nèi)，移入另瓶或皿中，再補(bǔ)加一定量克隆培養(yǎng)液，置CO2溫箱中繼續(xù)培養(yǎng)、增殖，使之形成新的細(xì)胞群后，即轉(zhuǎn)用常規(guī)培養(yǎng)法培養(yǎng)。 

必須保證分離出來(lái)的細(xì)胞確為一個(gè)而不是兩個(gè)或更多。因此必須提高克隆形成率才易克隆成功，為此常采取以下一些措施： 
使用適應(yīng)性培養(yǎng)基或條件培養(yǎng)基（Conditional Medium）。制備方法： 
1.培養(yǎng)同源細(xì)胞（未克隆前時(shí)的同一細(xì)胞）至半?yún)R合狀態(tài)時(shí)，更換一次培養(yǎng)液，再繼續(xù)培養(yǎng)24~48小時(shí)后，吸出所有培養(yǎng)液。 
2.離心：3000~4000/分離心10分鐘，吸取上清液。 
3.濾過：再經(jīng)直徑0.22μm濾孔的濾膜過濾，低溫凍存貯備用；用時(shí)取1分適應(yīng)培養(yǎng)基+2分培養(yǎng)基混合使用。