絨毛來(lái)源于胚胎的中胚層,zui早的初級(jí)干絨毛出現(xiàn)于孕三周初,孕8周左右是絨毛發(fā)育zui旺盛時(shí)期。目前國(guó)內(nèi)外絨毛取材多選于8-9周。研究資料表明,絨毛取樣不影響胚胎的發(fā)育及胎盤(pán)的功能。但取樣的失敗可導(dǎo)致胚胎丟失而終止妊娠。
絨毛取樣前者首先要檢查陰道分泌物以判別陰道的潔凈度,防止取樣導(dǎo)致宮內(nèi)感染。其次需做B超檢查,一是確定胚胎大小,二是確定胚芽有無(wú)心血管搏動(dòng),三是確定胚芽在子宮內(nèi)的位置,用以判別取材時(shí)間,是否取材及取樣器進(jìn)宮的角度及深度。
1、 實(shí)驗(yàn)材料
婦科陰道沖洗物品、絨毛取樣器、5ml注射器、培養(yǎng)皿、小鑷子、5ml離心管、甲酸、檸檬酸鈉、冰乙酸、PMRI 1640、秋水仙素、載玻片等。
2、 培養(yǎng)液配制
PRMI 1640 10-15ml
秋水仙素10ug/ml 1ml
3、 操作過(guò)程
(1)1‰新潔而滅沖洗陰道,用卵圓鉗固定子宮頸,根據(jù)婦查及B超提示選擇角度及濃度探性插入絨毛取樣器,當(dāng)有彈性阻擋感且深度符合B超所示時(shí),抽出取樣器內(nèi)芯,接上5ml注射器,抽出4-5ml,此時(shí),注射器內(nèi)可見(jiàn)有血性液體流進(jìn);
(2)取一干凈培養(yǎng)皿,內(nèi)加PRNI 1640 5ml,內(nèi)含秋水仙素0.06ug/ml。慢慢抽出取樣器,將所吸出物注入培養(yǎng)皿內(nèi),并用1640沖洗注射器及取樣器,混勻。置培養(yǎng)箱30-40分鐘;
(3)挑選發(fā)育良好的絨毛放入另一小培養(yǎng)皿中,用預(yù)溫37℃的0.075M。KCL與10%檸檬酸鈉1∶1混合液漂洗兩次。
(4)用眼科小剪剪碎絨毛,再將2滴秋堿加入上途漂洗低滲液低滲30分鐘;
(5)加3∶2的甲醇冰乙酸固定液0.2ml,預(yù)固定,1000rpm8分鐘,棄上清液;(6)加新鮮配制的3∶2固定液3ml;固定30分鐘,2000rpm8分鐘,棄上清液;(7)第二次固定可加3∶1甲醇冰乙酸固定液3ml固定30分鐘,2000rpm8分鐘,棄上清液;
(8)離心后,加所余體積的60%冰乙酸,打勻,2分鐘后加等量甲醇,打勻,2000rpm8分鐘,棄上清液。
(9)3m1 3∶1甲冰固定液過(guò)夜,冰水制片;
(10)80℃考片2小時(shí),自然冷卻。(11)G分帶處理,觀片。