（一）材料及試劑 
1．豬瘟單抗純化抗原 
2．兔抗豬IgG酶標(biāo)抗體 
3．豬瘟陽(yáng)性血清 
4．豬瘟陰性血清 
1～4均由的生物制品所購(gòu)買(mǎi)。 
5．elisa反應(yīng)板 
6．包被液 
碳酸鈉 1.50g 
2.93g 
H2O加至 1 000ml 
pH值9.6 
7．PBS液 
氯化鈉 8.90g 
磷酸二氫鉀 0.20g 
無(wú)水 2.13g 
加雙餾水 1 000ml 
8．PBS－吐溫洗滌液 
PBS液 1 000ml 
犢牛血清 5ml 
混合即可 
9．底物溶液 
⑴ 0.1Mol/L檸檬酸液 
檸檬酸 21g 
雙蒸餾水加至 1 000ml 
⑵ 0.2Mol/L Na2HPO4液 
Na2HPO4·12H2O 71.6g 
雙蒸餾水 加至 1 000ml 
⑶ pH5.0磷酸鹽－檸檬酸緩沖液 
取⑴液 24.30ml 
⑵液 25.70ml 
混勻即可 
⑷鄰苯二胺液 
?、且?50ml 
雙餾水 50ml 
磷苯二胺 20mg 
30%H2O2 0.15ml 
待鄰苯二胺溶化后再加H2O2，現(xiàn)用現(xiàn)配。 
10．終止液 
濃H2SO4(98%) 22.2ml 
H2O 177.80ml 
（二）操作方法 
1．用包被液將豬瘟弱毒單抗純化酶聯(lián)抗原、豬瘟強(qiáng)毒單抗純化酶聯(lián)抗原各做100倍稀釋，每孔包被100µl，4℃濕盒過(guò)夜。 
2．次日取出，甩去孔內(nèi)液體，3×3′沖洗。 
3．將待檢血清以PBS液做400倍稀釋，每孔加100µl同時(shí)將豬瘟陽(yáng)性血清、豬瘟陰性血清各做100倍稀釋，于對(duì)照孔中加100μl。37℃溫育1.5h～2h。 
4．重復(fù)第二步，取出，甩去孔內(nèi)液體，3×3′洗滌。 
5．將兔抗豬IgG酶標(biāo)抗體以PBS液做100倍稀釋，每孔加100μl，37℃溫育1.5h～2h。 
6．重復(fù)第4步。 
7．每孔加底物溶液100µl，室溫下觀察顯色反應(yīng)。當(dāng)陰性對(duì)照孔稍顯色時(shí)，立即終止反應(yīng)，并以陰性孔做空白對(duì)照。 
8．每孔加終止液50µl立即于酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)儀測(cè)定490nm波長(zhǎng)的光密度。 
（三）結(jié)果判定 
在豬瘟弱毒酶聯(lián)板上，OD≥0.2，為豬瘟弱毒抗體陽(yáng)性；OD＜0.2，為豬瘟弱毒抗體陰性。 
在豬瘟強(qiáng)毒酶聯(lián)板上，OD≥0.5，為豬瘟強(qiáng)毒抗體陽(yáng)性；OD＜0.2，為豬瘟強(qiáng)毒抗體陰性。