一.原理
RNA提取技術(shù)不僅是分子生物學(xué)技術(shù)的重要組成部分,也是功能基因組學(xué)科研技術(shù)的重要基礎(chǔ)。從RNA水平研究生物體內(nèi)基因的調(diào)控機(jī)制,已成為分子生物學(xué)研究的一個(gè)重要手段。對(duì)某一生物或組織進(jìn)行性狀研究,首先要獲得該性狀基因,從組織細(xì)胞中分離完整的RNA對(duì)于分子克隆和基因表達(dá)分析等實(shí)驗(yàn)是至關(guān)重要的,如Northern印跡及雜交分析、cDNA合成等實(shí)驗(yàn)的成效在很大程度上取決于RNA的質(zhì)量。利用提取的RNA人們可以對(duì)特定的基因表達(dá)進(jìn)行定量的檢測(cè),從分子水平的了解細(xì)胞生命活動(dòng)的規(guī)律。通常一個(gè)典型的哺乳動(dòng)物細(xì)胞約含有10-5μgRNA ,其中80%~85%為rRNA(主要是28S、18 S和5.8 S、5S四種類型);10%~15%為tRNA和核內(nèi)小分子RNA。
這些高峰度的RNA的大小和序列確定,可通過(guò)凝膠電泳、密度梯度離心、陰離子交換層析和高壓液相層析(HPLC)分離。相反,占RNA總量1%~5%的為mRNA 。mRNA 雖然大小和核苷酸序列各不相同,從數(shù)百至數(shù)千堿基不等,但大多數(shù)真核細(xì)胞mRNA在其3"端均有一寡聚腺苷酸(polyA)組成的尾,其長(zhǎng)度一般足以吸附于寡聚脫氧胸苷酸—纖維素