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上海士鋒生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第14年

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標(biāo)準(zhǔn)品
培養(yǎng)基
培養(yǎng)基原料 霍亂弧菌診斷血清 大腸艾希氏菌診斷血清 志賀氏菌屬診斷血清 沙門氏菌屬診斷血清 標(biāo)準(zhǔn)血清,診斷血清 抗生素藥敏紙片 微生物配套試劑 微生物生化管 管裝培養(yǎng)基 即用型液體培養(yǎng)基 一次性培養(yǎng)基平板 顯色培養(yǎng)基 臨床培養(yǎng)基 菌種保存培養(yǎng)基 四環(huán)素檢定、厭氧亞硫酸鹽還原桿菌檢測(cè)培養(yǎng)基 維生素檢測(cè)培養(yǎng)基 一次性衛(wèi)生用品衛(wèi)生檢測(cè)培養(yǎng)基 罐頭食品商業(yè)無菌檢測(cè)培養(yǎng)基 飲用水及水源檢測(cè)培養(yǎng)基 藥品、生物制品檢測(cè)培養(yǎng)基 化妝品檢測(cè)培養(yǎng)基 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基 啤酒檢驗(yàn)培養(yǎng)基 軍團(tuán)菌檢測(cè)培養(yǎng)基 支原體檢測(cè)培養(yǎng)基 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 彎曲桿菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌、厭氧菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 阪崎腸桿菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 溶血性鏈球菌檢測(cè)培養(yǎng)基 李斯特氏菌檢測(cè)培養(yǎng)基 弧菌檢測(cè)培養(yǎng)基 乳酸菌、雙歧桿菌檢測(cè)培養(yǎng)基 酵母、霉菌檢測(cè)培養(yǎng)基 檢測(cè)培養(yǎng)基 沙門氏菌、志賀氏菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 大腸菌群、糞大腸菌群、大腸桿菌及腸桿菌科檢測(cè)培養(yǎng)基 細(xì)菌總數(shù)檢測(cè),增菌培養(yǎng)基
抗體
生物試劑
細(xì)胞
菌株
血清
細(xì)胞分離試劑
試劑盒

SDS法提取植物基因組DNA

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本方法由Dellaporta,Wood和Hicks(1983)的方法修改而成。其基本原理是研磨的組織細(xì)胞用熱的SDS裂解后,加入高濃度的KAc,0℃放置以除去蛋白和多糖類雜質(zhì),zui后用乙醇或異丙醇沉淀。
一 材料、試劑和儀器
1 材料 新鮮的組織材料或-80℃凍存的材料
2 試劑
(1)提取緩沖液
Tris-HCl 100mmol/L(pH8.0)
EDTA 50mmol/L (pH8.0)
NaCl 500 mmol/L
滅菌后加β-巰基乙醇至10 mmol/L
(2)裂解液20%SDS
(3)高鹽溶液5mol/L KAc
(4) RNAseA 10mg/ml
(5) 異丙醇
(6)滅菌ddH2O或TE
3. 儀器: 離心機(jī), 恒溫水浴, 臺(tái)式高速離心機(jī),電泳裝置
二 實(shí)驗(yàn)程序
1取幼嫩的組織材料1-2g,用蒸餾水沖洗干凈,再用滅菌ddH2O沖洗2次,放入經(jīng)液氮預(yù)冷的研缽中,加入液氮研磨至粉末狀,用干凈的滅菌不銹鋼勺轉(zhuǎn)移粉末到加有500μL提取液的離心管中,輕輕混勻。
2 向管中加入50μL20%SDS溶液,混勻,不可過于強(qiáng)烈震蕩以防基因組DNA斷裂 ,65℃保溫10min,并不時(shí)搖動(dòng)。
3 加入150μL 5mol/L KAc,混勻,置冰上20-30 min。
4 4℃,15 000rpm離心15min,轉(zhuǎn)移上清到另一離心管中,加入0.7V的異丙醇,混勻,-20℃沉淀30 min 。
5 12 000rpm離心10min回收基因組DNA沉淀,吹干后加入適量的滅菌ddH2O或TE溶解DNA。
6 加入1/10體積的RNaseA,37℃保溫20min,除去RNA。
7 CI抽提后,加2V乙醇,-20℃沉淀30 min 。12 000rpm離心10min回收基因組DNA沉淀。
8 用400μL 70%乙醇洗一次后,吹干,加入適量的滅菌ddH2O或TE溶解DNA。
9 電泳檢測(cè)完整性。

三、結(jié)果分析
1. 用紫外分光光度計(jì)在230nm、260nm、 280nm和310nm波長分別讀數(shù)。其中260nm

用瓊脂糖凝膠電泳(0.8%)檢測(cè)核DNA的完整性(見圖2 )。

完整性好的基因組DNA應(yīng)是一條比23Kb滯后的電泳帶, 若降解則成為彌散狀。
電泳前緣為未除干凈的RNA。
2.如果DNA沉淀呈白色透明狀而且溶解后成粘稠狀,說明DNA含有較多的多糖類物質(zhì),可以在取材前將植物放暗處24hr,以達(dá)到去除淀粉的目的。
3. DNA沉淀呈棕色,難以酶切
植物材料含有大量酚類化合物,與DNA共價(jià)結(jié)合,使DNA呈棕色,并抑制DNA的酶解反應(yīng)。為防止此情況出現(xiàn),可在加入2 ×CTAB的同時(shí)加入2-5%的巰基乙醇,或者加入亞精胺(100μl DNA加5μl 0.1mol/L的亞精胺)。
4.DNA中含有多糖或鹽類
將DNA用乙醇或異丙醇沉淀出來,離心,沉淀用70%乙醇清洗兩次或更多次,吹干后重溶于TE中。(注意乙醇一定要吹干, 否則電泳點(diǎn)樣時(shí), 樣品上漂)
5.DNA已降解電泳條帶呈彌散狀
樣品降解可能有兩種情況:一是機(jī)械振動(dòng)過劇烈,二是操作過程中DNase污染。在提取DNA的各個(gè)操作過程中要避免劇烈振蕩,提取液及用品要高溫高壓滅菌。另外,使用Tip頭吸取過程中應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡,Tip頭應(yīng)剪去Tip頭尖,避免反復(fù)凍融DNA。

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