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新一代蛋白研究工具——抗體芯片(圖)

時間:2015-3-10閱讀:714
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蛋白組學研究是即基因組學研究后的生命科學發(fā)展的一個大方向之一。蛋白質的結構和功能zui終直接影響著生命活動的變化,基因轉錄水平的研究只能在一定程度上反映基因表達產(chǎn)物的變化,而真正發(fā)揮功能的蛋白要經(jīng)過轉錄后加工、翻譯調控以及翻譯后加工等許多步驟和調控才能形成,因而對蛋白質的直接研究才能真實的解釋各種生命現(xiàn)象。但是目前研究蛋白質的手段和方法還沒有很大的發(fā)展,所以尋找有效、快捷的蛋白分析技術成為了至關重要的一個環(huán)節(jié)。

蛋白芯片技術的出現(xiàn)給蛋白組學研究帶來新思路。蛋白組學研究中一個主要的內容就是要研究在不同生理狀態(tài)或病理狀態(tài)下蛋白水平的量變,微型化,集成化,高通量化的抗體芯片就是一個非常好的研究工具,它也是蛋白芯片中發(fā)展zui快的芯片,而且在技術上已經(jīng)日益成熟。這些抗體芯片有的已經(jīng)在向臨床應用上發(fā)展,比如腫瘤標志物抗體芯片等,還有很多已經(jīng)用在研究的各個領域里。

*張商品化的抗體芯片是由美國BD Clontech公司推出的。這是一張用于研究的抗體芯片,芯片上排列了378種已知蛋白的單抗(Ab Microarray 380,目錄號 K1847-1),這些單抗對應的蛋白都是細胞結構和功能上十分重要的蛋白,涉及信號傳導、腫瘤、細胞周期調控、細胞結構、細胞凋亡和神經(jīng)生物學等廣泛的領域。通過這張芯片,我們在一次實驗中就能夠比較幾百種蛋白的表達變化。


Ab Microarray 380上抗體是經(jīng)過精心挑選的,這些抗體不僅可以識別人源的蛋白,對小鼠和大鼠樣品同樣有效。另外,每個抗體的結合親和力都經(jīng)過了實驗測定,從多種抗體來源的克隆中篩選出反應特異性好,交叉反應程度小,信號明顯的抗體,并且還要保證信號與抗原濃度有著良好的線性關系。優(yōu)化的抗體探針才可以保證反應的特異和靈敏(可檢測20pg/ml的抗原濃度)。芯片的檢測是用熒光報告分子,常用的熒光掃描儀都能夠完成。

*代的蛋白芯片和DNA芯片一樣是作為一種定性分析的工具,可用于分析樣品之間相關蛋白的相對表達豐度;還可以作為DNA芯片的補充,用于研究蛋白和基因表達之間的關系。

操作流程

Ab Microarray 380抗體芯片并不要求特殊的實驗操作,只要一般常規(guī)的操作就可以完成以往極為復雜耗時的工作。整個操作流程包括:從50~200mg組織或細胞、體液中進行蛋白質抽提——用Cy5和Cy3兩種不同顏色的熒光分子分別標記兩個樣品——洗去多余的標記分子——與芯片雜交孵育——掃描分析結果。整個過程從樣品制備到結果分析只要一天即可完成,你只要準備好樣品、熒光染料、脫鹽純化柱(處理體液樣品時用)和熒光掃描儀,其他的試劑全部由試劑盒提供。

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