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上海士鋒生物科技有限公司
中級會(huì)員 | 第14年

13127537090

標(biāo)準(zhǔn)品
培養(yǎng)基
培養(yǎng)基原料 霍亂弧菌診斷血清 大腸艾希氏菌診斷血清 志賀氏菌屬診斷血清 沙門氏菌屬診斷血清 標(biāo)準(zhǔn)血清,診斷血清 抗生素藥敏紙片 微生物配套試劑 微生物生化管 管裝培養(yǎng)基 即用型液體培養(yǎng)基 一次性培養(yǎng)基平板 顯色培養(yǎng)基 臨床培養(yǎng)基 菌種保存培養(yǎng)基 四環(huán)素檢定、厭氧亞硫酸鹽還原桿菌檢測培養(yǎng)基 維生素檢測培養(yǎng)基 一次性衛(wèi)生用品衛(wèi)生檢測培養(yǎng)基 罐頭食品商業(yè)無菌檢測培養(yǎng)基 飲用水及水源檢測培養(yǎng)基 藥品、生物制品檢測培養(yǎng)基 化妝品檢測培養(yǎng)基 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基 啤酒檢驗(yàn)培養(yǎng)基 軍團(tuán)菌檢測培養(yǎng)基 支原體檢測培養(yǎng)基 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 彎曲桿菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌、厭氧菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 阪崎腸桿菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 溶血性鏈球菌檢測培養(yǎng)基 李斯特氏菌檢測培養(yǎng)基 弧菌檢測培養(yǎng)基 乳酸菌、雙歧桿菌檢測培養(yǎng)基 酵母、霉菌檢測培養(yǎng)基 檢測培養(yǎng)基 沙門氏菌、志賀氏菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 大腸菌群、糞大腸菌群、大腸桿菌及腸桿菌科檢測培養(yǎng)基 細(xì)菌總數(shù)檢測,增菌培養(yǎng)基
抗體
生物試劑
細(xì)胞
菌株
血清
細(xì)胞分離試劑
試劑盒

普魯士藍(lán)染色試劑盒使用說明書

時(shí)間:2019/8/19閱讀:2103
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普魯士藍(lán)染色試劑盒(核固紅法)

產(chǎn)品組成

 

2×50ml

2×100ml

Storage

試劑A):

Perls stain

A1Perls stain A

25ml

50ml

RT

 

A2Perls stain B

25ml

50ml

RT

臨用前,取 A1A2 等量混合,即為Perls stain,不宜提前配制。

試劑(B): 核固紅染色液

50ml

100ml

RT 避光

產(chǎn)品說明:

含鐵血黃素Hemosiderin是一種血紅蛋白源性色素,為金黃色或棕黃色顆粒,因其含鐵、金黃色,故稱為含鐵血黃素。當(dāng)紅細(xì)胞被巨噬細(xì)胞吞噬后,在溶酶體酶的作用下,血紅蛋白被分解為不含鐵的橙色血質(zhì)和含鐵的含鐵血黃素。

Perls 普魯士藍(lán)反應(yīng)(Prussian blue reaction)又稱為含鐵血黃素染色,即經(jīng)過亞鐵氰化和稀酸處理后可以產(chǎn)生藍(lán)色,常見于吞噬細(xì)胞內(nèi)會(huì)間質(zhì)內(nèi),主要顯示三價(jià)鐵鹽。Perls 普魯士藍(lán)是非常經(jīng)典的組織化學(xué)反應(yīng),是顯示組織內(nèi)三價(jià)鐵的一種敏感、傳統(tǒng)優(yōu)良的方法,其染色原理為:亞鐵氰化溶液使三價(jià)鐵離子從蛋白質(zhì)中被分離出來,三價(jià)鐵與亞鐵氰化反應(yīng),生成一種不溶解的藍(lán)色化合物即三價(jià)鐵的亞鐵普魯士藍(lán),所以該反應(yīng)被稱為普魯士藍(lán)反應(yīng)。三價(jià)鐵的亞鐵

化物是一種很穩(wěn)定的化合物,在反應(yīng)后可用紅色染色劑進(jìn)行復(fù)染,如核固紅、伊紅、中性紅等。

Perls stain 常用于顯示局部組織內(nèi)各種出血性病變,常見于吞噬細(xì)胞內(nèi)。在判斷含鐵血黃素沉積時(shí),用 Perls  反應(yīng)可以得到證實(shí),該染色方法可以很好的區(qū)分含鐵血黃素和其他色素。該染色液穩(wěn)定性好、可以保存、不易產(chǎn)生沉淀、應(yīng)用范圍廣、可以進(jìn)行復(fù)染。該染色液的復(fù)染液采用核固紅,是經(jīng)典、常用的復(fù)染液。

自備材料:

1. 10%的中性福爾馬林

2. 系列乙醇

3. 蒸餾水

4. 4%的多聚甲醛

操作步驟(僅供參考

(一)石蠟切片染色

1、 組織固定于 10%中性福爾馬林,常規(guī)脫水包埋。

2、 切片厚度 4um,常規(guī)脫蠟至水。

3、 蒸餾水水洗 1min。

4、 切片入 Perls stain見注意事項(xiàng) 4,浸染 15-30m

 

5、 蒸餾水充分沖洗 2-5min。

6、 入核固紅染色液,淡染細(xì)胞核 5-10min。

7、 自來水沖洗 1-5s

8、 常規(guī)脫水透明,中性樹膠封固。

(二)冰凍切片染色

1、 無需脫蠟,直接迅速用蒸餾水沖洗 23min。

2、 染色、水洗、透明、封固步驟同石蠟切片的染色步驟。

(三)細(xì)胞染色

14%多聚甲醛固定 1020min

2、 自來水沖洗 2 次,每次 2min。

3、 蒸餾水沖洗 2 次,每次 2min

4、 染色、水洗、透明、封固步驟同石蠟切片的染色步驟。

染色結(jié)果:

 

陰性對照(可選)

取相同連續(xù)切片脫蠟至水。置于 5%的草酸中,孵育 2-6h 后,經(jīng) Perla stain,需要步驟同上。結(jié)果為陰性。

注意事項(xiàng):

1、切片脫蠟應(yīng)盡量干凈。

2、組織固定常采用 10%的中性福爾馬林,經(jīng)普通福爾馬林固定后,組織會(huì)有損傷。避免使用酸性固定劑,酪酸鹽處理也會(huì)妨礙鐵的保存。

3、整個(gè)操作過程中容器要干凈,避免使用金屬鐵制品,洗切片和容器時(shí)以蒸餾水為宜,因普通水內(nèi)含鐵質(zhì)。

4Perls stain 染色時(shí),應(yīng)根據(jù)樣本情況調(diào)整著色時(shí)間。

5、所有檢查切片都應(yīng)使用同一個(gè)陽性對照切片,選擇適合的對照非常重要。尸檢肺組織是一個(gè)很好的對照,包含相當(dāng)數(shù)量的鐵陽性巨噬細(xì)胞(心衰細(xì)胞)

6、系列乙醇應(yīng)經(jīng)常更換新液。

7、 冰凍切片和細(xì)胞的染色,根據(jù)具體情況摸索實(shí)驗(yàn)條件。

8、 為了您的健康和安全,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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