貼壁細(xì)胞細(xì)胞在培養(yǎng)瓶長成致密單層后，繼續(xù)生長的空間不足，培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成份也消耗較多，同時代謝廢物也有較多堆積，需要分瓶培養(yǎng)，對細(xì)胞進(jìn)行傳代擴(kuò)增。

對于貼壁不太緊的細(xì)胞如293，可以直接吹散后分瓶。而對于貼壁較緊的細(xì)胞如CHO，則需要以消化后再吹散分瓶，一般過程為 （以下操作均按無菌操作的要求進(jìn)行）：

將長成致密單層細(xì)胞的細(xì)胞瓶中原來的培養(yǎng)液棄去； 加入0.25％溶液，視細(xì)胞瓶的大小加入體積為0.5ml或更多，以使充分浸潤； 一般消化時間約為1至3分鐘，肉眼觀察瓶壁半透明的細(xì)胞層，當(dāng)見到出現(xiàn)細(xì)針孔空隙時，棄去溶液，并加入適量的細(xì)胞培養(yǎng)液終止消化； 視實驗要求分入多瓶繼續(xù)培養(yǎng)，一般為一傳二到一傳四的比例。
這里，消化的程度是一個關(guān)鍵：消化過度則對細(xì)胞的活性損傷較大，并有部分細(xì)胞漂浮，隨棄去的流失；消化不足則細(xì)胞難于從瓶壁上吹下，反復(fù)吹打同樣也會損傷細(xì)胞活性。 影響消化速度的因素較多，主要有溶液的活性（配制條件、凍存或4℃保存時間長短、是否反復(fù)凍融、化凍后存放時間及溫度等）、消化時的溫度（氣溫、細(xì)胞培養(yǎng)瓶及溶液的溫度）以及所加溶液的多少等 。以筆者的經(jīng)驗，以輕吹或加培養(yǎng)液后輕搖可下較好，但對于經(jīng)驗不太充分的實驗者而言是較難判斷掌握的。 下面將細(xì)胞生長及不同消化程度的光學(xué)顯微鏡照片列出以供參考。

所用細(xì)胞為CHO貼壁細(xì)胞，培養(yǎng)基為含10％小牛血清的DMEM-F12，倒置顯微鏡10X40, 數(shù)碼相機300萬像素。

取細(xì)胞凍存管一支，于40°C水中速融；25ml細(xì)胞方瓶中加入含10%COSMIC小牛血清的DMEM-F12培養(yǎng)基10ml，將凍存管中細(xì)胞全部洗入瓶中，置37°C 2.5%二氧化碳孵箱中靜置培養(yǎng)。4小時后倒去全部培養(yǎng)基以去除凍存液，更換10ml培養(yǎng)基，同上靜置培養(yǎng)。

貼壁細(xì)胞傳代
經(jīng)24小時培養(yǎng)后，生長情況為：

貼壁細(xì)胞傳代
經(jīng)48小時培養(yǎng)后，細(xì)胞已長成致密單層：

貼壁細(xì)胞傳代
致密單層細(xì)胞在細(xì)胞瓶上呈霧狀，使瓶壁呈半透明：

棄去培養(yǎng)液，在此可先搖動細(xì)胞瓶，使老化死亡貼壁情況不好的細(xì)胞隨培養(yǎng)液棄去。

貼壁細(xì)胞傳代
加入2.5%后，細(xì)胞逐漸皺縮變圓，細(xì)胞間隙增大不再致密：

剛加入，細(xì)胞仍呈致密單層：

貼壁細(xì)胞傳代
細(xì)胞開始皺縮但不明顯，仍維持細(xì)胞正常形態(tài)：

貼壁細(xì)胞傳代
細(xì)胞明顯皺縮變小，細(xì)胞間隙增大不再致密，部分細(xì)胞維持正常形態(tài)，部分細(xì)胞皺縮變圓：

貼壁細(xì)胞傳代
細(xì)胞基本皺縮變圓，此時細(xì)胞吹打可下：

貼壁細(xì)胞傳代
細(xì)胞*皺縮變圓，此時應(yīng)棄去，加入培養(yǎng)基后輕搖可將細(xì)胞從細(xì)胞瓶壁上洗下，將細(xì)胞懸液用吸管吹散后傳代：

有經(jīng)驗后，可肉眼對光觀察帖壁半透明的細(xì)胞層，判斷消化程度。

貼壁細(xì)胞傳代
如消化過頭，會見到許多細(xì)胞脫落隨棄去的溶液流失。也可以在倒數(shù)第二、三步時棄去，用瓶中殘留的繼續(xù)作用至zui后一步的消化程度，這樣略有點過也影響不大。