一、實驗目的 
通過實驗，掌握姐妹染色單體分染技術。 
二、實驗原理 
姐妹染色單體交換是近年來細胞遺傳學研究的一個新方法。其原理是，當細胞接觸到5－溴脫氧核苷(Brdu)時，Brdu可作為核苷酸前體物，專一替代胸腺嘧啶摻入到新合成的DNA鏈中。只要通過兩個細胞復制周期，就可使姐妹染色單體中的一條單體的DNA雙鏈中，有一股鏈是摻入有Brdu的，而另一條單體的DNA雙鏈中，兩股鏈全摻入有Brdu.這樣的細胞經(jīng)過分化染色處理，即可見到同一條染色體的兩條姐妹染色單體有明顯的差異,有一條單體為深色,另一條為淺色。 
三、實驗材料 
體重為20～30克左右的純小白鼠，蠶豆種子。 
四、實驗器具和藥品試劑 
顯微鏡、冰箱、水浴鍋、天平、離心機、剪刀、鑷子、注射器、吸管、離心管、載片、量筒、燒杯、紫外燈、大培養(yǎng)皿。 
秋水仙素 、5－溴脫氧尿苷、液體石蠟、檸檬酸鈉、氯化鉀、2×SSC溶液、磷酸緩沖液、鹽酸、Giemsa 原液。 
五、實驗方法和步驟 
(一)動物實驗法 
1．稱100mg Brdu用5ml液體石蠟在小燒杯內(nèi)混勻，冰箱保存?zhèn)溆谩?nbsp;
2．用2ml注射器（8號針頭）吸取藥液，按每克體重注射1mg的量注入小鼠右腋皮下或腹腔內(nèi)。 
3．注射56小時后，按5ug/克的量注射秋水仙素溶液。 
4．4小時后處死動物，取出大腿骨和脛骨。 
5．按“小白鼠染色體的制備與觀察”實驗的方法制備染色體標本。 
6．將染色體標本放入37℃溫箱內(nèi)處理24小時。 
7．在恒溫水浴鍋（48℃）內(nèi)放一大培養(yǎng)皿，把標本片分放在皿內(nèi)，上復一張擦鏡紙，滴加適量的2×SSC溶液，用15W紫外燈照射30分鐘，燈管距離標本片約6厘米。 
8．照射完畢以蒸餾水或磷酸緩沖液沖去標本上的2×SSC溶液。 
9．用3％Giemsa 染液染色10分鐘。 
10．清水沖洗，片干后鏡檢。 
(二)植物實驗法 
1．選取當年的蠶豆種子，經(jīng)水泡脹后，轉(zhuǎn)入20℃溫箱培養(yǎng)。 當主根長至3cm時，剪去根尖生長點，以利于長出更多的側(cè)根。 
2．當大多數(shù)側(cè)根長至0.5cm時，用盛有5×10-4M Brdu溶液的小瓶，繼續(xù)在20℃黑暗條件下處理側(cè)根24～36小時。 
3．切取側(cè)根根尖(0.5cm)浸入0.05％的秋水仙素溶液中預處理3.5～4小時。 
4．用卡諾氏液固定3～24小時。 
5．將根尖放在1N HCL 60℃條件下水解10分鐘。 
6．經(jīng)水洗后用席夫試劑染色30分鐘。 
7．取一著色的根尖，放在載片上，加一滴45％醋酸，蓋上蓋片，用鑷子或橡皮頭鉛筆將材料敲呈一薄霧狀。 
8．選擇分散的中期分裂相細胞，在高倍鏡下可看到姐妹染色單體間呈現(xiàn)明顯的深淺差別。深染的是BB－染色單體，淺染的是BT－染色單體。部分染色體上出現(xiàn)姐妹染色單體互換。凡染色單體端部出現(xiàn)的交換計為1個SCE，中部出現(xiàn)的計為兩個SCE。