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原代肺泡上皮細胞的體外分離培養(yǎng)

時間:2014/12/4閱讀:2088
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原代 肺泡上皮 細 胞 ( Primary Alveolar Epithelial Cell s ) 的體外分離培養(yǎng)
 
1 、*無血液殘留肺 臟組織 :
2、消化肺 組 織 :
常用細胞消化酶:、彈性蛋白酶、膠原酶。
經(jīng)支氣管將酶灌注到完整的肺中消化,或把肺碎放入消化液中消化。前者比后者更有效。
3 、分離 純 化 細 胞 :
原代肺泡上皮細胞的分離純化主要方法:
(1)密度梯度離心法:
密度梯度離心分離細胞的原理是不同細胞的沉降系數(shù)不同,在密度梯度離心中細胞所處的位置也相應(yīng)不同。 用ficoll或percoll不連續(xù)梯度離心法分離肺泡Ⅱ型上皮細胞。
(2)濾膜分離法:
肺泡Ⅱ型上皮細胞約10mm,比巨噬細胞(約25mm)和Ⅰ型細胞 (50mm-100mm)小,用150mm孔徑的濾膜初濾除去大的組織碎片,30mm-40mm孔徑的濾膜除去全部Ⅱ型細胞和部分巨噬細胞,采用 15mm的濾膜精濾。用濾膜分離操作簡單,它和其他分離方法聯(lián)合使用可以提高純度。
(3)流式細胞技術(shù)法:
根據(jù)不同細胞之間的熒光差異,用熒光物質(zhì)標記篩選。肺泡上皮細胞內(nèi)含有豐富的脂類物質(zhì),用親脂性熒光素標記,可以得到純度很高的細胞。流式技術(shù)分離細胞的產(chǎn)量很低,但純度*。這種技術(shù)經(jīng)過完善在將來會更有吸引力。
(4)免疫黏附法:
用IgG包被培養(yǎng)板,把肺泡上皮細胞懸液置于板上,巨噬細胞和其他大多數(shù)非肺泡上皮細胞因為含有Fc片段的受體而與IgG結(jié)合,吸附到板上,不黏附的肺泡上皮細胞被沖洗下來,簡便易行,可除去絕大多數(shù)的巨噬細胞,有效的提高肺泡上皮細胞純度。
(5)貼壁選擇法:
貼壁選擇原理:肺泡上皮細胞完成貼壁的時間不同,這種特性用肺泡上皮細胞培養(yǎng)時做篩選。
總之,根據(jù)肺泡上皮細胞培養(yǎng)zui終目的,綜合幾種方法能達到預(yù)期效果。
例如:(1)先用濾膜過濾;(2)再用IgG包被法。
4 、PriCells的產(chǎn)品
(1)  原代肺泡上皮細胞, 5×105  細胞數(shù)/1ml
(2) 原代細胞分離試劑盒
(3) 原代細胞分離鑒定盒
(4) 原代上皮細胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基
(5) 原代上皮細胞培養(yǎng)特制添加劑
編輯: bean1984

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