一、原理
在紙層析中，通常支持相是含水的，移動(dòng)相是有機(jī)溶劑.但是脂肪酸（fattyacid）等化合物宜用有機(jī)溶劑為支持相和以含水溶劑為移動(dòng)相，這樣能更好地進(jìn)行分配，也就是所謂“反相紙層析法”。由于不同的脂肪酸在兩相中分配系數(shù)不同，所以在層析濾紙上移動(dòng)速率就有差異，這樣就使混合脂肪酸各組分被分開。然后用醋酸銅處理，將脂肪酸轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的銅鹽，再用紅氨酸顯色，即可得到藍(lán)灰色點(diǎn)狀層析圖譜。

二、材料、儀器設(shè)備及試劑 
材料：油菜籽。
（二）儀器設(shè)備：1. 層析紙；2. 層析缸；3. 層析架；4. 顯色盤；5. 烘箱或電吹風(fēng)；6.微量進(jìn)樣器。
（三）.試劑。

三、實(shí)驗(yàn)步驟 
（一）樣品制備切樣：將一粒干燥的油菜種子，用刀片沿著與臍平行的方向切下外子葉一部分（注意不要損傷胚），裝入小指管中（或用有穴白瓷板代替），也可采用整粒種子。酯化：向盛有樣品的小試管中加入0.1ml（2滴）KOH-CH3OH溶液，并將樣品用玻棒研碎，然后放置6～8h。加入0.15ml（2～3滴）1mol/L HCl及0.1ml（2滴）石油醚。
（二）點(diǎn)樣在層析紙一邊用鉛筆輕輕劃一直線，每隔1.5cm用鉛筆輕輕點(diǎn)一記號(hào)，編號(hào)。將層析紙放入石臘油溶液中浸泡，取出涼干（使編號(hào)向上）。在層析紙各編號(hào)處，用針刺一小孔，然后用毛細(xì)管取樣品上清液0.01ml，按編號(hào)順滴入孔洞處（每次取樣后，用石油醚洗微量進(jìn)樣器的針頭）。
（三）展開溶劑系統(tǒng)與條件將點(diǎn)好樣的層析紙固定在層析架上（使編號(hào)朝下），放入盛有醋酸溶液的層析缸中，醋酸溶液的多少以能浸泡層析紙但液面低于點(diǎn)樣處為宜。至展層劑上升到距濾紙頂端1cm處為止，取出層析紙，涼干。
（四）顯色：將層析紙浸入醋酸銅溶液中，使生成脂肪酸銅鹽.用清水稍許沖洗，再放入潔凈的瓷盤中，用流水漂洗0.5h左右。將層析紙小心取出，用干毛巾或?yàn)V紙吸干大部分水分后，置于40℃烘箱中干燥。將層析紙?jiān)诩t氨酸溶液中一帶而過，與脂肪酸銅鹽作用立即顯出藍(lán)灰色的斑點(diǎn)。

四. 結(jié)果分析
繪出反相紙層析色譜上五種不飽和脂肪酸的位置的示意圖。
［附注］：油菜籽中不飽和脂肪酸在反相紙層析圖譜中的順序由下而上為：芥酸、花生烯酸、油酸、、亞麻酸。