一、原理

T淋巴細(xì)胞質(zhì)內(nèi)含有酯酶，可以水解α-醋酸萘酯，產(chǎn)生α-萘酚，α-萘酚又可與重氮付品紅偶聯(lián)生成不溶性的偶氮付品紅萘酚，在T淋巴細(xì)胞漿酯酶存在的部位生成不溶性的黑紅色的顆粒沉淀，而b淋巴細(xì)胞無(wú)此反應(yīng)。以資鑒別。

二、材料與試劑

1．固定液 40%甲醛
2．分層液（聚蔗糖－） 比重1.077+0.001，配制見(jiàn)細(xì)胞分離技術(shù)一章。
3．染色液
（1）付品紅液：取2g付品紅加入2N HCl 100ml, 溫水浴溶解后保存于4℃?zhèn)溆谩?br />（2）溶液（現(xiàn)用現(xiàn)配）：取0.14g加入雙蒸餾水10 ml，振蕩溶解。
（3）α-醋酸萘酯溶液：取2gα-醋酸萘酯溶于乙二醇單甲醚100ml中，貯于棕色瓶?jī)?nèi)，于4℃保存。
（4）0.067 Mol/L pH7.6PB液
甲液 KH2PO4 9.08溶于1 000ml雙蒸餾水
乙液 KH2PO4 9.47g溶于1 000ml雙蒸餾水
（6）甲基綠復(fù)染液：取1g甲基綠，溶于100ml雙餾水中，4℃保存。
（7）應(yīng)用染色液（孵育液）的配制 取1ml溶液緩慢滴入1ml的付品紅液中，邊加邊搖勻，付品紅液由紅色變?yōu)闇\黃色，混合后，靜置1min～2min，將此混合液倒入30ml pH7.6PB液中，充分混合后，再加入α-醋酸萘酯溶液0.85ml，邊加邊攪拌，混勻后使用。

三、操作方法

1．標(biāo)本的制備 取肝素抗凝血1ml，加等量或適量的生理鹽水稀釋?zhuān)》謱右?ml加入離心管內(nèi)，然后將上述稀釋的血液沿管壁緩緩加入至分層液上，注意不要打破兩層界面。以水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)1 000～1 500r/min離心20min。結(jié)果形成四層，zui上面*層為血漿層，第二層為淋巴細(xì)胞（包括單核細(xì)胞）層，第三層為分層液，第四層為紅血球。用毛細(xì)管吸取血漿層，然后吸取淋巴細(xì)胞放入適量的Hank’s液（或生理鹽水）中，充分搖勻。2 000r/min離心5min～10min棄上清液，再重復(fù)洗滌一次，即獲淋巴細(xì)胞。以此淋巴細(xì)胞粥涂片。自然干燥后，以40%甲醛蒸汽固定10min。
2．染色鏡檢
（1）于固定的標(biāo)本片上滴加孵育液，以覆蓋為度，37℃染45min～60min，蒸餾水沖洗。
（2）甲基氯復(fù)染1min～5min，蒸餾水沖洗。
（3）自然干燥，鏡檢。

四、結(jié)果判定

在胞漿內(nèi)出現(xiàn)大小不一、數(shù)量不等的黑紅色顆粒的細(xì)胞為T(mén)淋巴細(xì)胞，無(wú)此顆粒的為B淋巴細(xì)胞。同時(shí)計(jì)數(shù)淋巴細(xì)胞100～200個(gè)。求出它們各占的百分比。
幾種動(dòng)物的T淋巴細(xì)胞正常值
馬 57.8+2.009%
騾 51.8+2.037%
小白鼠 76.42+4.44%
豚鼠 73.43+8.04%
兔 77.0+2.79%
人 62.3+8.62%