1. 什么是細(xì)胞轉(zhuǎn)化?何時(shí)會(huì)發(fā)生細(xì)胞轉(zhuǎn)化?
細(xì)胞轉(zhuǎn)化是細(xì)胞發(fā)生遺傳性狀改變的一種變化,它的基礎(chǔ)是DNA或基因的突變。從屬性上說(shuō),基因突變導(dǎo)致生物體發(fā)生的轉(zhuǎn)化,有利于生物體的轉(zhuǎn)化,也有不利于生物體的轉(zhuǎn)化(例如癌變)。
在體外培養(yǎng)的細(xì)胞,受到致突變作用時(shí)便可發(fā)生轉(zhuǎn)化,凡能誘發(fā)DNA(基因)結(jié)構(gòu)改變的因素均視為誘發(fā)因素,有物理因素(如射線)、化學(xué)因素(MNNG)、病毒(EBV、SV40)、癌基因也是,但需要借助載體和輔助因素。
在未施加任何誘變因素處理的情況下,細(xì)胞自發(fā)出現(xiàn)的轉(zhuǎn)化就是SPONTENOUS TRANSFORMATION。當(dāng)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行并存或者反復(fù)傳代時(shí),在一些難以控制的因素影響下,即可發(fā)生,如血清質(zhì)量下降、病毒污染、溫度和pH值波動(dòng)以及細(xì)胞對(duì)外界環(huán)境敏感。
2. 自發(fā)轉(zhuǎn)化有無(wú)向某種細(xì)胞進(jìn)行特異轉(zhuǎn)化的性質(zhì)?這期間有無(wú)特殊規(guī)律?
自發(fā)轉(zhuǎn)化是一種原因不明的轉(zhuǎn)化現(xiàn)象,與人工誘發(fā)體外培養(yǎng)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化不同,它并無(wú)特異的轉(zhuǎn)化趨向。說(shuō)到規(guī)律, 自發(fā)轉(zhuǎn)化的一般表現(xiàn)就是核型異倍化、獲得永生性、接觸抑制消失等,轉(zhuǎn)化細(xì)胞形態(tài)上變得肥大,有向三維空間生長(zhǎng)的趨勢(shì),容易Piled up。細(xì)胞生長(zhǎng)匯合后并不發(fā)生接觸抑制,而是繼續(xù)分裂增殖,就像癌變(實(shí)際是一種惡性轉(zhuǎn)化)。其轉(zhuǎn)化的基本過(guò)程還是一樣的,誘發(fā)(initiation)--DNA損傷與修復(fù)--發(fā)展和表現(xiàn)(expression)。
3. 自發(fā)性轉(zhuǎn)化的鑒定要采取那些檢測(cè)手段?
至于轉(zhuǎn)化的準(zhǔn)確界定:Focus也就是轉(zhuǎn)化灶可以被分離培養(yǎng),能形成傳代細(xì)胞系,可用于進(jìn)行細(xì)胞生物學(xué)性狀的檢測(cè)。細(xì)胞培養(yǎng)中正常細(xì)胞和轉(zhuǎn)化細(xì)胞之間性狀的差別有很多鑒定指標(biāo),一般應(yīng)做以下的實(shí)驗(yàn)分析:
(1)一般性狀(形態(tài)、生長(zhǎng)曲線、倍增時(shí)間)
(2)遺傳學(xué)特性(染色體標(biāo)記分析等)
(3)惡性測(cè)試試驗(yàn),浸潤(rùn)性生長(zhǎng)、分化性、粘附性(整合蛋白表達(dá))、對(duì)血清要求等,對(duì)了,還有凝集試驗(yàn)(凝集素反應(yīng))
其中zui后一項(xiàng)可以說(shuō)明轉(zhuǎn)化后的細(xì)胞是否為惡性轉(zhuǎn)化。
4. 怎么區(qū)分細(xì)胞形態(tài)的改變是自發(fā)性轉(zhuǎn)化抑或其他因素引起的一般形態(tài)改變?
細(xì)胞形態(tài)改變時(shí)是自發(fā)轉(zhuǎn)化還是一般性改變,這就需要從如上所述的轉(zhuǎn)化表現(xiàn)進(jìn)行判斷了。但是對(duì)于不做遺傳而僅是培養(yǎng)自己所需細(xì)胞的研究人員來(lái)說(shuō),簡(jiǎn)單的判定就是,只要細(xì)胞形態(tài)生長(zhǎng)的讓你無(wú)法接受,就是spontenous transformation,其他未知因素引起細(xì)胞形態(tài)廣泛改變的機(jī)制也是DNA或是基因突變的結(jié)果,只是expression的程度不同罷了。
5. 自發(fā)性轉(zhuǎn)化是不是不可逆的?它的發(fā)生是一猝而就,還是經(jīng)過(guò)數(shù)代細(xì)胞突變的累積而致?是否遺傳?
先回答第二個(gè)小問(wèn)題:在一個(gè)受轉(zhuǎn)化因素作用的細(xì)胞群中,不是所有的細(xì)胞都一定受到損害,受到影響并發(fā)生轉(zhuǎn)化啟動(dòng)進(jìn)入發(fā)展階段的細(xì)胞可能只是一小部分,散在于那些未受損的正常細(xì)胞之間,大約經(jīng)過(guò)13個(gè)細(xì)胞周期的增殖,整個(gè)細(xì)胞群匯合成片,正常細(xì)胞發(fā)生接觸抑制,但轉(zhuǎn)化細(xì)胞卻不斷進(jìn)展,從而表現(xiàn)出轉(zhuǎn)化現(xiàn)象。由此來(lái)看,它的發(fā)生是由細(xì)胞個(gè)體量變積累到發(fā)生質(zhì)變的過(guò)程,不是一蹴而就。
因此,若是在早期及時(shí)去除轉(zhuǎn)化細(xì)胞或轉(zhuǎn)化灶,使正常細(xì)胞不受影響的話,spontenous transformation can be controled! OR,you have to discard all of your cells.
zui后,像癌變一樣,細(xì)胞轉(zhuǎn)化也是一種遺傳學(xué)改變,轉(zhuǎn)化細(xì)胞分離培養(yǎng)能夠形成傳代細(xì)胞系。
6. 自己培養(yǎng)的細(xì)胞發(fā)生自發(fā)轉(zhuǎn)化,如何處理?
盡可能維持恒定的培養(yǎng)環(huán)境,出再小面積轉(zhuǎn)化灶時(shí)可用細(xì)胞刮機(jī)械去除,但治標(biāo)不治本,返還其zui適環(huán)境才是之計(jì)。
7. 關(guān)于“人工誘發(fā)體外轉(zhuǎn)化”
一般在遺傳學(xué)研究中應(yīng)用較多,是研究癌變?cè)淼闹匾椒ā0┳?,也就是?xì)胞惡性轉(zhuǎn)化,是一個(gè)發(fā)生在體內(nèi)的過(guò)程,便通過(guò)體外細(xì)胞培養(yǎng),可以用人工方法誘發(fā)轉(zhuǎn)化,而且重復(fù)性好,從而構(gòu)成體外癌變模型,不僅有理論意義,也可用于篩選抗癌藥物和檢測(cè)環(huán)境中致癌物,當(dāng)前在國(guó)內(nèi)外這一技術(shù)已普遍應(yīng)用。