一、原理:維生素C具有化學(xué)還原性。2,6-二氯酚靛酚鈉鹽水溶液呈藍(lán)色,在酸性環(huán)境中為玫瑰色,當(dāng)其被還原時(shí),則脫色。根據(jù)其各自性質(zhì),利用2,6,-二氯酚靛酚在酸性環(huán)境中滴定有維生素C的樣品溶液。開(kāi)始時(shí),樣品液中的維生素C立即將滴入的2,6-二氯酚靛酚還原脫色,當(dāng)樣品液中維生素全部被氧化時(shí),再滴入2,6-二氯酚靛酚就不再被還原脫色而呈玫瑰色。故當(dāng)樣品液用2,6-二氯酚靛酚標(biāo)準(zhǔn)液滴定時(shí),溶液出現(xiàn)淺玫瑰色時(shí)表明樣品液中的維生素C全部被氧化,達(dá)到滴定終點(diǎn)。此時(shí),記錄滴定所消耗的2,6-二氯酚靛酚標(biāo)準(zhǔn)量,按下述計(jì)算出樣品中還原型維生素C的含量。
二、材料與試劑
綠豆芽、10%鹽酸溶液
2,6-二氯酚靛酚溶液:稱取0.21g,0.26g2,6-二氯酚靛酚溶于250ml蒸餾水中,稀釋至1000ml。過(guò)濾,裝入棕色瓶?jī)?nèi),置于冰箱中保存,不得超過(guò)3天。使用前用新配制的標(biāo)準(zhǔn)抗壞血酸溶液標(biāo)定。取5ml標(biāo)準(zhǔn)抗壞血酸加入5ml偏磷酸-醋酸溶液。然后用2,6-二氯酚靛酚溶液的濃度,以每ml2,6-二氯酚靛酚溶液的濃度,以每毫升2,6-二氯酚靛酚溶液相當(dāng)于抗壞血酸的mg數(shù)來(lái)表示。
標(biāo)準(zhǔn)抗壞血酸溶液:準(zhǔn)確稱取純抗壞血酸結(jié)晶50mg溶于偏磷酸-醋酸溶液定容到250ml。裝入棕色瓶中,儲(chǔ)于冰箱內(nèi)。
偏磷酸-醋酸溶液:稱取偏磷酸15g,溶于40ml冰醋酸和450ml蒸餾水所配的混合液中。過(guò)濾。儲(chǔ)于冰箱內(nèi),此液保存不得超過(guò)10天。
三、操作方法
1、制備含維生素C的樣品提取液:稱取30g綠豆芽置于研缽中研磨,放置片刻(約10分鐘),用2層紗布過(guò)濾,將濾液(如混濁可離心)濾入50ml容量瓶中。反復(fù)抽提2-3次,將濾液并入同一容量瓶中。zui后,用酸化的蒸餾水(每10ml蒸餾水加10%鹽酸1滴)定容,混勻,備用。
2、維生素C含量的測(cè)定:量取樣品提取液10ml于錐形瓶中。用微量滴定管,以2,6-二氯酚靛酚溶液滴定樣品提取液,呈微弱的玫瑰色,持續(xù)5秒鐘不褪為終點(diǎn),記錄所用2,6-二氯酚靛酚的ml數(shù)。整個(gè)滴定過(guò)程不要超過(guò)2分鐘。另取10ml用10%鹽酸酸化的蒸餾水做空白對(duì)照滴定。樣品提取液和空白各做三份。
3、計(jì)算結(jié)果
維生素Cmg/100g樣品=((VA-VB)×S)/W×100
VA為滴定樣品提取液所用的2,6-二氯酚靛酚的平均ml數(shù)
VB為滴定空白對(duì)照所用的2,6-二氯酚靛酚的平均ml數(shù)
S為1ml2,6-二氯酚靛酚溶液相當(dāng)于維生素C的mg數(shù)
W為10ml樣品提取液中含樣品的g數(shù)