如何使用雙縮脲試劑測定蛋白質(zhì)含量

時間：2013/8/13閱讀：2163

一、原理：蛋白質(zhì)含有兩個以上的肽鍵，因此有雙縮脲反應(yīng)。雙縮脲反應(yīng)是指蛋白質(zhì)在堿性溶液中與二價銅離子結(jié)合，生成紫紅色絡(luò)合物的反應(yīng)。其顏色的深淺與蛋白質(zhì)的含量成正比，而與蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量和氨基酸的組成無關(guān)。

二、材料與試劑

雙縮脲試劑：稱取1.50g五水硫酸銅和6.0g酒石酸鉀鈉（四水），用500ml左右的蒸餾水溶解，在攪拌下加入300ml10%氫氧化鈉溶液，定容至1L,儲存于塑料瓶中?？墒褂?。若出現(xiàn)黑點或紅色沉淀時，則不能再用。加入0.1%KI可防止銅的析出。

1%標(biāo)準(zhǔn)酪蛋白溶液：用0.05M氫氧化鈉溶液配制，酪蛋白的純度可用微量凱氏定氮法。

試管、分光光度計

三、操作過程

1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作：于試管中分別加入0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml的1%標(biāo)準(zhǔn)酪蛋白溶液，用水補足1ml。然后各加入4ml雙縮脲試劑，充分搖勻在室溫下反應(yīng)30min，于540nm波長下測定光吸收率。以酪蛋白的含量為橫坐標(biāo)，光吸收值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2、樣品測定

取樣品溶液1ml加入4ml雙縮脲試劑，搖勻后在室溫下反應(yīng)30min，測定光吸收值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線查出蛋白質(zhì)含量。

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如何使用雙縮脲試劑測定蛋白質(zhì)含量

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