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上海士鋒生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第14年

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標(biāo)準(zhǔn)品
培養(yǎng)基
培養(yǎng)基原料 霍亂弧菌診斷血清 大腸艾希氏菌診斷血清 志賀氏菌屬診斷血清 沙門氏菌屬診斷血清 標(biāo)準(zhǔn)血清,診斷血清 抗生素藥敏紙片 微生物配套試劑 微生物生化管 管裝培養(yǎng)基 即用型液體培養(yǎng)基 一次性培養(yǎng)基平板 顯色培養(yǎng)基 臨床培養(yǎng)基 菌種保存培養(yǎng)基 四環(huán)素檢定、厭氧亞硫酸鹽還原桿菌檢測(cè)培養(yǎng)基 維生素檢測(cè)培養(yǎng)基 一次性衛(wèi)生用品衛(wèi)生檢測(cè)培養(yǎng)基 罐頭食品商業(yè)無菌檢測(cè)培養(yǎng)基 飲用水及水源檢測(cè)培養(yǎng)基 藥品、生物制品檢測(cè)培養(yǎng)基 化妝品檢測(cè)培養(yǎng)基 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基 啤酒檢驗(yàn)培養(yǎng)基 軍團(tuán)菌檢測(cè)培養(yǎng)基 支原體檢測(cè)培養(yǎng)基 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 彎曲桿菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌、厭氧菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 阪崎腸桿菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 溶血性鏈球菌檢測(cè)培養(yǎng)基 李斯特氏菌檢測(cè)培養(yǎng)基 弧菌檢測(cè)培養(yǎng)基 乳酸菌、雙歧桿菌檢測(cè)培養(yǎng)基 酵母、霉菌檢測(cè)培養(yǎng)基 檢測(cè)培養(yǎng)基 沙門氏菌、志賀氏菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 大腸菌群、糞大腸菌群、大腸桿菌及腸桿菌科檢測(cè)培養(yǎng)基 細(xì)菌總數(shù)檢測(cè),增菌培養(yǎng)基
抗體
生物試劑
細(xì)胞
菌株
血清
細(xì)胞分離試劑
試劑盒

技術(shù)介紹:用ELISA法檢測(cè)幽門螺桿菌抗體

時(shí)間:2013/7/14閱讀:727
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1 材料和方法

1.1 材料

①40孔聚苯乙烯微量凹孔板:上海塑料三廠產(chǎn)品。②酶聯(lián)板離心籃:根據(jù)40孔酶聯(lián)板本實(shí)驗(yàn)室自行設(shè)計(jì)制成。③DG—Ⅰ型酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀:南京華東電子管廠產(chǎn)品。④試劑:過氧化物酶(HRP),R2=3.2,美國Sigma公司產(chǎn)品。鄰苯二胺(OPD):上海白鶴化工廠產(chǎn)品,按文獻(xiàn)配制。包被液:取碳酸鈉1.59g加2.93g,蒸餾水1000ml配成。洗滌液:以上未加吐溫—20的洗滌液100ml+2%小牛血清+4%聚乙二醇(PEG)。封板液:5%小牛血清。戊二醛固定液:25%戊二醛液,100ml裝,Kochligh進(jìn)口分裝,用時(shí)稀釋成0.25%戊二醛固定液。終止液:2NH2SO4。⑤抗原的制備:將澳大利亞*佩思醫(yī)院的Hp標(biāo)準(zhǔn)菌株(NCTC11638)及從檢查患者胃粘膜活檢標(biāo)本分離出的Hp菌株分別接種于心腦血平板,37℃培養(yǎng)5d后取菌落作生化與血清學(xué)鑒定(自制兔抗Hp抗體),然后取單個(gè)菌落移種于另一血平板,繼續(xù)培養(yǎng)3d,經(jīng)鑒定后將其大量增殖培養(yǎng),3d后將菌苔刮下,置生理鹽水中制成菌液,加福爾馬林固定(0.1%~0.3%),4℃過夜,3000r/nin離心30min,沉淀3次,將zui后1次沉淀懸于少量PBS液內(nèi),用比濁管沒出細(xì)菌濃度,制成含菌3×109ml,置冰箱冰凍,反復(fù)凍融3次,經(jīng)顯微鏡檢查無菌體存在后,制成可溶性抗原,采用Lowry氏法蛋白定量,-20℃保存?zhèn)溆?。⑥臨床血清標(biāo)本:采自檢查患者,隨機(jī)采取1988年8~10月檢查病人共38人,抽靜脈血2ml,分離血清貯存-20℃?zhèn)溆?。⑦陰性?duì)照血清,進(jìn)行ELISA測(cè)定,取其平均OD值作對(duì)照。⑧酶標(biāo)羊抗人IgG結(jié)合物(SAHIgG—HRP)的制備:按過碘酸鹽改良法,略加改進(jìn)標(biāo)記制成酶標(biāo)抗體。即HRP8.0ml,22℃較攪20min。加乙二醇6滴,繼續(xù)攪拌5min,對(duì)pH4.2,0.001mol/L醋酸鹽緩沖液(用2molHC1調(diào)pH)透析過夜,中間換水4次,加羊抗人IgG(上海生物制品研究所產(chǎn)品)14mg,逐滴加pH,1.0mol碳酸鹽緩沖液,使pH升到9.0~9.5,室溫較攪2h,加硼氫化鈉(4mg/ml)0.2ml,置4℃2h,對(duì)pH7.2,0.01molPB-0.4molNaCl緩沖液在4℃透析平衡。換水4次,收取透析袋內(nèi)結(jié)合物,以50%飽和度硫酸銨溶液鹽析去除游離酶后,測(cè)定精制結(jié)合物,E/P克分子比值合格后,將結(jié)合物小瓶分裝置-20℃保存,備用。⑨尿素酶測(cè)定法和Hp的分離培養(yǎng)法參考文獻(xiàn)進(jìn)行。

1.2 方法

并稍加改進(jìn),即:抗原包被微量滴定板:用包被液將抗原按2×108億/ml(含蛋白8.6μg)稀釋后,每孔加100μ,離心籃離心20min2000r/min后,倒去孔內(nèi)液體,然后加入0.25%戊二醛液50μl/孔,4℃固定30min,倒去戊二醛,用洗滌液洗3次(每次3min),加5%小牛血清液,200ml/孔,經(jīng)37℃30min封板后倒去孔內(nèi)液體。每孔加待檢血清(1:100稀釋)100ml,37℃保溫1h后,如上洗滌3次,同時(shí)做陰性對(duì)照孔和空白孔。之后于各孔內(nèi)加和新鮮稀釋的酶標(biāo)羊抗人IgG結(jié)合物100ml,37℃保溫半小時(shí),于各孔中加入2NH2SO450μl終止反應(yīng)后,于酶聯(lián)測(cè)定儀以波長490nm測(cè)定OD值,將測(cè)得標(biāo)本OD值(P)與陰性對(duì)照OD值(N)比(P/N),若P/N比大于或等于2.0為陽性。

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