1.免疫小鼠和脾細胞的制備

免疫：取6~8周齡Balb/C雌鼠，基礎(chǔ)免疫2周，靜脈再加強免疫一次，3~5天后用于融合。
脾細胞制備：

1．引頸處死小鼠，用酒精消毒表體。

2．無菌條件下取出脾臟，剃除結(jié)締組織和脂肪，用5ml無血清培養(yǎng)液沖洗一次。

3．把脾臟置于已消毒的90~100目不銹鋼網(wǎng)或尼龍紗網(wǎng)中。

4．在脾中部切開一小口，用注射器芯從一端輕輕壓擠，再用無血清培養(yǎng)液沖洗，令細胞通過紗網(wǎng)，收集入平皿中，或用注射器向脾臟內(nèi)注入3 ml無血清培養(yǎng)液，反復(fù)抽吸數(shù)次方法獲取細胞，再制成細胞懸液亦可。

5．把細胞懸液注入50ml離心管中，加10~20ml培養(yǎng)液，輕輕吹打數(shù)次，室溫中置5分鐘。

6．離心（800~1000轉(zhuǎn)/分）計數(shù)，備用。

2. 瘤細胞培養(yǎng)（無特殊要求）

骨髓瘤細胞呈懸浮或輕微附著形式生長，如附著性生長的細胞多時，用吸管輕輕吹打或輕輕叩擊培養(yǎng)容器即可分離下來。通常要維持細胞于指數(shù)生長期（細胞培養(yǎng)時間為15~20小時），每3~5天取細胞0.2~1ml移入到10ml新培養(yǎng)液中，其zui大細胞密度不能超過5×105~106/ml。一般使用含有高糖的DMEM培養(yǎng)液，并補加有pH的穩(wěn)定劑HEPES。
3.飼細胞的制備：常用小鼠胸腺細胞或小鼠的腹腔細胞

小鼠腹腔細胞制備方法：

1．引頸處死小鼠，用酒精消毒表體。

2．切開腹部皮膚剝向兩側(cè)，暴露出腹壁。

3．用無菌7號針頭注射器，吸取3ml無血清培養(yǎng)液。

4．用小鑷夾起腹壁，注入3ml無血清培養(yǎng)液，用手反復(fù)輕輕揉腹壁，再反復(fù)抽吸3~5次。

5．收集末次吸得的細胞，注入50ml的離心管中，再加20ml無血清培養(yǎng)液，用吸管漂洗一次。

6．離心，去上清，用含血清培養(yǎng)基調(diào)節(jié)細胞濃度為2×105/ml