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419次產(chǎn)品及特點(diǎn) 十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)不僅可用于檢測(cè)蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量,而且也是分離純化蛋白質(zhì)的重要工具之一,隨著蛋白質(zhì)技術(shù)的微量化,有必要從凝膠中回收蛋白質(zhì)以用于制備抗體、免疫印跡、氨基酸組分分析或末端序列測(cè)定等。本產(chǎn)品就是專門為此用途開發(fā)的微量蛋白膠回收法,它具有下列特點(diǎn):
1. 簡(jiǎn)單,不需要復(fù)雜而昂貴的儀器(如電洗脫儀)。
2. 適用于變性膠(SDS-PAGE)和非變性膠。
3. 回收率一般在50-90%之間(跟蛋白質(zhì)大小,洗脫時(shí)間相關(guān))。
4. 跟后續(xù)的實(shí)驗(yàn)兼容,包括2-D電泳、質(zhì)譜測(cè)序等。
規(guī)格及成分 成份 50次小盒包裝
(90402-50)
溶液A 10 mL
溶液B 50 mL
微型離心管研磨杵
(CAT:80603A) 50只
使用手冊(cè) 1份
運(yùn)輸及保存 常溫運(yùn)輸,4℃保存(微型離心管研磨杵可以室溫保存),有效期一年。
自備試劑 無
使用方法 1. 按常規(guī)方法進(jìn)行變性(SDS-PAGE)或非變性蛋白電泳。
2. 切取含目的蛋白的膠(盡可能地把多余的膠切除,否則會(huì)影響回收效率)。注意:固定和染色后蛋白回收效果很差,所以建議把樣品分多孔上樣,電泳后只切其中一個(gè)樣孔的膠條進(jìn)行固定和染色,然后將此膠條放回到在整體膠中原來的位置,通過顯色膠條上的蛋白條帶找到在未染色膠上對(duì)應(yīng)區(qū)域,并切下此區(qū)域的膠進(jìn)行回收。
3. 將切下的膠塊轉(zhuǎn)移到1.5 mL塑料離心管中。
4. 用研磨杵充分將膠塊壓磨成盡可能細(xì)小的碎片。
5. 加入200 uL溶液A,4℃搖晃洗脫至少2-16小時(shí)(過夜)。此時(shí)將溶液B放在冰箱預(yù)冷。
6. 10,000 g離心10分鐘,轉(zhuǎn)移上清到新的離心管中,注意不要吸取碎膠。
7. 加入5倍體積的預(yù)冷的溶液B,搖晃混勻。
8. -20℃放置至少10-30分鐘。
9. 室溫12,000 g離心5-20分鐘,棄上清。
10. 室溫充分晾干,得到的沉淀即為回收的蛋白質(zhì)。回收的蛋白質(zhì)可溶解在適當(dāng)?shù)木彌_液中,可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)(2-D電泳、質(zhì)譜測(cè)序等)。
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