1.        在冰上溶解除酶外的各種組份，混勻，稍離心。在反應(yīng)管中加入以下組份：

注：如在反應(yīng)管中加入本公司PCR級(jí)綠如藍(lán)染料1uL（水則少加1 uL），則可直接在熒光定量PCR儀中進(jìn)行熒光定量檢測(cè)。

2.       混勻，置于60-65℃保溫30-120分鐘。注意：如果不使用Loop引物，則保溫2小時(shí)；如果使用Loop引物，則保溫30分鐘。

3.       80℃10分鐘滅活Bst DNA聚合酶。

4.       產(chǎn)物置于-20℃備用或立即用于下游檢測(cè)。擴(kuò)增產(chǎn)物可選下列方法之一檢測(cè):

1）        瓊脂糖凝膠電泳。取擴(kuò)增產(chǎn)物5 uL，1-2%的瓊脂糖凝膠電泳，可見LAMP特征性電泳圖譜；

2）        向擴(kuò)增產(chǎn)物中直接加入本公司PCR級(jí)綠如藍(lán)染料（另售）1 uL，混勻，稍離心。將反應(yīng)管置于紫外透射儀或凝膠成像系統(tǒng)中，紫外燈下可見綠色熒光產(chǎn)生；

3）        熒光定量檢測(cè)。

5.       結(jié)果分析：

1）        如果沒有擴(kuò)增，則需要用本試劑提供的陽(yáng)性對(duì)照進(jìn)行擴(kuò)增。本試劑盒提供5次陽(yáng)性對(duì)照，反應(yīng)按下表設(shè)置：

混勻后，置于60℃保溫120分鐘，其余操作同上。注意：本對(duì)照引物中沒有Loop引物，所以保溫2小時(shí)。

如果陽(yáng)性對(duì)照能夠擴(kuò)增出，則說明試劑盒沒有問題，可能是模板或引物的問題。如果陽(yáng)性對(duì)照沒有擴(kuò)增出條帶，則是試劑盒的問題，請(qǐng)跟廠家。