酵母蛋白質(zhì)快速微量提取試劑盒使用說明書

時(shí)間：2012/6/20閱讀：350

產(chǎn)品及特點(diǎn)本產(chǎn)品專門用于快速提取微量酵母蛋白用于SDS-PAGE凝膠電泳和Western印跡分析。本產(chǎn)品結(jié)合玻璃珠破壁和化學(xué)法破壁兩種方法，適合于各種形態(tài)的各種酵母材料。本產(chǎn)品的其主要特點(diǎn)是：

1.破壁效率高，能達(dá)到80-90%。

2.可以處理各種酵母樣品。

3.操作簡(jiǎn)單，得到的裂解液可以直接用于SDS-PAGE和Western印跡分析。

規(guī)格及成分成份50次包裝

溶液A100 mL

溶液B成分一50 mL

溶液B成分二1.5 g

玻璃珠，400μL5 g

使用手冊(cè)1份

運(yùn)輸及保存常溫運(yùn)輸、4℃保存（溶液B成分二需-20℃保存），有效期一年。

自備試劑酵母培養(yǎng)基

使用方法準(zhǔn)備工作：將溶液B成分二（干粉）全部加到50mL溶液B成分一中，充分搖晃使之全部溶解，成為溶液B，然后分裝成小分（體積根據(jù)每次實(shí)驗(yàn)的樣品數(shù)決定）并放-20℃長(zhǎng)期保存。

1、將酵母細(xì)胞接種到5mL YPD培養(yǎng)基中，30℃搖晃（250rpm/分鐘）過夜培養(yǎng)使其OD600達(dá)到0.5～2.0。

2、把酵母細(xì)胞培養(yǎng)物轉(zhuǎn)到裝有2mL預(yù)冷溶液A的10-15 mL離心管中，混勻。

3、4℃ 5000g離心5分鐘沉淀酵母細(xì)胞，吸出上清液。

4、用30μL 溶液B懸浮酵母細(xì)胞，并快速轉(zhuǎn)移到1.5mL塑料離心管中。

5、100℃下保溫3分鐘，使蛋白酶失活，樣品存放于-20℃。

6、加入0.1g的玻璃珠。

7、在旋渦振蕩器上劇烈振蕩混合2-10分鐘。

8、加入70 μl 溶液B，稍加振蕩，置100℃保溫1分鐘。

9、取5-20μl抽提液上樣直接進(jìn)行SDS-PAGE凝膠電泳。

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