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技術文章

胰島素放免試劑盒說明書

閱讀:237發(fā)布時間:2012-9-8

 

胰島素*說明書[125I]
藥品名稱
通用名稱:碘[125I]胰島素*
英文名稱:Iodine[125I]Insulin Radioimmunoassay Kit
漢語拼音:Dian [125I]Yidaosu Fangshemianyifenxi Yaohe
成分
                  規(guī)格
成分
100
50
制品狀態(tài)
Ins.標準品(S1~S5
5
5
凍干品
125I-Ins.(紅色)
1
1
凍干品
Ins.緩沖液
1瓶/40ml
1瓶/40ml
液 體
豚抗-Ins.抗體(藍色)
1
1
凍干品
驢抗豚免疫分離劑
1瓶/50ml
1瓶/25ml
液 體
Ins.質控血清
2
2
凍干品
性狀】液體組分(免疫分離劑除外)應澄清,無沉淀或絮狀物;凍干組分應成疏松狀,復溶后應無沉淀或絮狀物。
【放射性核素半衰期】本品所用核素為碘[125I],其物理半衰期(T½)為60天。
臨床意義
胰島素(Insulin,簡稱Ins.),是由胰島β細胞合成其前體,經加工后分泌的蛋白質激素,它由51個氨基酸組成α、β兩條肽鏈,通過兩個二硫鍵連結在一起,分子量為5734D。不同種屬動物的胰島素與人胰島素結構略有不同,豬胰島素結構與人的zui相似,只是在β鏈上的zui后一個氨基酸不同,因此兩者在免疫分析中有明顯的交叉反應。
胰島素是促進合成的激素,主要作用是促進葡萄糖的氧化和糖原生產,抑制糖原異生,從而維持血糖恒定。胰島素缺乏時,血糖濃度升高,可超過腎糖閾,發(fā)生依賴胰島素糖尿病。
本藥盒用于血清或血漿中胰島素含量的測定,主要用于對胰島β細胞的分泌功能和糖尿病的研究,確定糖尿病的類型;對胰島素瘤的診斷,探討冠心病機理,研究某些藥物對糖代謝的影響以及內分泌紊亂疾病等都有一定的意義和價值。
測定原理
利用均相競爭抑制原理,采用平衡競爭法對血清或血漿進行直接測定。標準或樣品中的Ins.和標記抗原共同與*的特異性抗體進行競爭性免疫反應。當樣品中Ins.濃度較高時,與抗體結合的標記抗原就少,反之,亦然。用免疫分離劑分離出抗原-抗體復合物,并測定結合物中的放射性。因標記抗原的結合量與樣品中Ins.呈一定的函數(shù)關系。因此,通過數(shù)學處理就能計算出樣品中的Ins.濃度。
適用儀器】適用于各類ν-*。
樣本要求
取靜脈血分離血清,待測;血漿則需加入抗凝劑,混勻,分離血漿后,待測;如不立即測量,可將樣品密封后,置于2~8℃或-20℃儲存?zhèn)錅y,2~8℃保存不應超過1周,-20℃保存不超過2個月。冰凍樣品在保存過程中應避免反復凍融。冰凍樣品測定前,講樣品置于室溫或常溫水中融化,并充分搖勻。
用法用量
1 試劑配制、使用方法和保存
(1)Ins.標準品:凍干品,向每瓶標準品中準確地加入1ml緩沖液溶解。溶解15分鐘后搖勻方可適用。溶解后各標準濃度值分別為5,15,45,135,405μIU/ml。標準復溶后2~8℃保存可穩(wěn)定42天,凍干品-20℃保存有效期內穩(wěn)定。
(2)125I-Ins.:凍干品,100管規(guī)格用10ml緩沖液溶解,50管規(guī)格用5ml緩沖液溶解。2~8℃保存,有效期內穩(wěn)定。如一次加樣超過100管,兩瓶混合后使用。100管標記物放射性不大于111 KBq(3μCi)。
(3)豚抗-Ins.抗體:凍干品,用緩沖液溶解,每瓶抗體加­6ml(如不填寫100T加10ml,50T加5ml緩沖液溶解)。抗體溶解后2~8℃保存可穩(wěn)定42天,凍干品-20℃保存有效期內穩(wěn)定。
(4)驢抗豚免疫分離劑:液體,加樣前必須搖勻!2~8℃保存,有效期內穩(wěn)定。開封后42天內穩(wěn)定。
(5)Ins.緩沖液:液體,2~8℃保存,有效期內穩(wěn)定。開封后42天內穩(wěn)定。
(6)Ins.質控血清:凍干品,使用前向每瓶質控血清中準確加入0.5ml蒸餾水溶解。復溶后2~8℃保存可穩(wěn)定42天,凍干品-20℃保存有效期內穩(wěn)定。有效期及附值,詳見質控血清適用說明書。
2 測定步驟
取圓底聚苯乙烯試管若干,用記號筆或特殊鉛筆編號NSB、S0~S5和待測樣品管等,然后用微量加樣器按下表加樣。加樣前所有試劑(尤其分離劑?。┌ù郎y樣品要搖勻,并且平衡到室溫。
加樣程序表                                                  單位:μl

           管別
試劑
總T
NSB
S0
S1~S5
待測樣品
Ins.緩沖液
200
100
Ins.標準品(S1~S5
100
質控或待測樣品
100
豚抗-Ins.抗體
100
100
100
125I-Ins.
100
100
100
100
100
混勻,37℃溫育2小時。
驢抗豚免疫分離劑
500
500
500
500
充分搖勻,室溫放置15分鐘,3500轉/分鐘離心15分鐘,吸棄上清,測各沉淀管的放射性計數(shù)(cpm)。

3 數(shù)據處理
(1) 聯(lián)機處理:由電腦自動處理得出結果。注意放射免疫方法和免疫放射方法由于原理不同,處理軟件也不一樣,用戶一定要使用適合的處理軟件進行數(shù)據處理。在此建議用戶使用logit-log或四參數(shù)數(shù)據處理模式。
(2) 手工作圖或計算器處理:
1). 百分結合率計算:設S0管計數(shù)為B0,各標準管或樣品管計數(shù)為B,非特異管計數(shù)為NSB,則百分結合率計算公式為:B/ B0=(B-NSB)/( B0-NSB)×100%
2). logit計算:各標準點或樣品管的logit值計算公式為:logit=ln(B/ B0)/(1-B/ B0
3). 手工作圖:以標準濃度取log值為橫坐標,對應的logit值為縱坐標在普通坐標紙上或以標準濃度為橫坐標,對應的B/B0為縱坐標在logit-log坐標紙上畫出標準曲線(理想化時是一條直線)。根據待測樣品的B/B0可以從坐標紙上查出樣品的濃度值。注意:如果使用普通坐標紙,查出的數(shù)值應取反對數(shù)才是zui后的濃度值。
4). 計算器處理:使用有線性擬合功能的計算器,可以比較方便地計算出樣品濃度值,具體操作方法請查閱計算器的使用說明書。
標準曲線舉例(僅供參考,不得用于實際計算)。         濃度單位:μIU/ml

項目
NSB
0
5
15
45
135
405
濃度值(ng/ml)
 
0
0.25
0.5
1
3
6
百分結合率(%)
B/T
B/B0
2
80
87
73
51
28.2
12.8
logit-log
主要曲線參數(shù)
A=3.33             B=-2.01                    R=-0.9999
ED75=12.93         ED50=45.62                 ED25=161.01

參考正常值
空腹血清胰島素參考正常值:14.0±8.7μIU/ml,范圍5~25μIU/ml。
餐后血清C-P峰值約為空腹時的5倍,峰值一般出現(xiàn)在餐后30~60分鐘(與進食食品種類有一定關系),3小時后接近空腹值。
單位換算:本批Ins.標準抗原,1mg=25IU
由于地區(qū)及使用儀器不同,所測的正常值會存在一定的差異,所以本說明書提供的正常值僅作參考,各實驗室能建立符合本實驗室要求的正常值范圍。
產品性能指標
1.    測定范圍:5~405μIU/ml。
2.    靈敏度:2μIU/ml。
3.    精密度:批內變異系數(shù)(CV)<10%;批間變異系數(shù)(CV)<15%。
4.    使用期限:見產品外包裝。
禁忌】本品僅供體外科研實驗用!
注意事項
1.    收到試劑盒后,盡快存放在2~8℃。
2.    使用前請詳細閱讀此說明書。
3.    不同藥盒或不同月份的同種藥盒的組分不得混用。
4.    吸棄上清液時,注意不得損失沉淀物,否則將明顯影響測定結果。
5.    當樣品中Ins.濃度高于405μIU/ml時,可將樣品用緩沖液稀釋5-10倍后復測,測定濃度乘以稀釋倍數(shù)即為樣品的濃度。
6.    藥盒請在有效期內使用。
7.    臨床標本均應視為有潛在傳染性,請按傳染病實驗室規(guī)程操作。
8.    使用本藥盒應注意放射防護,放射性廢棄物須按放射防護條例規(guī)定處理。
9.    使用本品的操作人員應經過專業(yè)技術培訓。
孕婦及哺乳期婦女用藥】由于本品僅供體外診斷用,兒童不需接觸本品,所以對其健康無損害。
貯藏】2~8℃保存。
有效期】1個月。
 
胰島素*說明書[125I]

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