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上海金穗生物科技有限公司

利用血清篩選噬菌體文庫(kù)交叉

時(shí)間:2013-3-12閱讀:725
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[方法]
1.將100ul含有2 ×1010個(gè)PEG—純化噬菌體顆粒的TBS,等量分加到多孔板各孔中,4℃孵育12小時(shí)。
2.用PBST洗滌數(shù)次,在室溫下每孔加250/ll封閉液封閉2小時(shí)。
3.用封閉液稀釋血清,其中含1×1010個(gè)/mlMl3噬菌體顆粒、50ul/ml的XLl—Blue細(xì)菌提取物以及2×1011個(gè)顆粒/ml PEG純化抑制子噬菌??寺。?室溫預(yù)孵育3小時(shí)。
4.除去板中封閉液,將預(yù)孵育的血清混合物加到噬菌體包被孔中,并在室溫下孵育3小時(shí)。
5.用PBST充分洗滌。
6.每孔加100ul堿性磷酸酶標(biāo)記二抗,用封閉液按l:5000比例稀釋?zhuān)⒃谑覝叵路跤?小時(shí)。
7,用PBST洗板數(shù)次,用底物緩沖液洗滌一次。
8.每孔加入100ul含lmg/ml p硝基苯磷酸的底物緩沖液,以顯示堿性磷酸酶反應(yīng)。

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