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qiagen205311QuantiTect Rev. Transcription Kit

cDNA合成和gDNA去除僅用20分鐘完成
有效去除基因組DNA，無需設(shè)計(jì)RNA特異性引物或探針
高特異性，即便是低豐度的轉(zhuǎn)錄本也能獲得高產(chǎn)量的cDNA
轉(zhuǎn)錄本的5' 和3' 端區(qū)域都可以進(jìn)行cDNA 合成

For 50 x 20 ul reactions: 100 ul 7x gDNA Wipeout Buffer, 50 ul Quantiscript Reverse Transcriptase, 200 ul 5x Quantiscript RT Buffer, 50 ul RT Primer Mix, 1.9 ml RNase-Free Water

逆轉(zhuǎn)錄試劑盒組分確保高效、高靈敏的Real-Time RT-PCR

組分	優(yōu)點(diǎn)
gDNA Wipeout Buffer	僅在real-time RT-PCR 中檢測RNA
Quantiscript Reverse Transcriptase	可用于廣泛RNA起始量（10 pg to 1 µg RNA），高特異性
Quantiscript RT Buffer	可通讀困難模板
RT Primer Mix	所有轉(zhuǎn)錄本區(qū)域合成cDNA, 甚至從5' 端區(qū)域

qiagen205311QuantiTect Rev. Transcription Kit

原理

為獲得準(zhǔn)確的real-time RT-PCR基因表達(dá)分析結(jié)果，很重要的是僅擴(kuò)增和檢測cDNA。基因組DNA的干擾可通過設(shè)計(jì)橫跨外顯子/外顯子邊界的引物或探針避免。盡管如此，在某些特殊情況下（如：cDNA來自一個(gè)單外顯子基因），起始RNA樣品必須無基因組DNA。

使用QuantiTect Reverse Transcription Kit，基因組DNA污染物可使用*的gDNA去除緩沖液迅速有效的去除（見圖：“高效去除基因組DNA，確保精確的Real-Time RT-PCR”）。因?yàn)榧兓疪NA樣品后無需另外采用DNA酶消化，從而可節(jié)省時(shí)間和費(fèi)用。并且也無需設(shè)計(jì)RNA特異性引物和探針。

低豐度轉(zhuǎn)錄本獲得更高產(chǎn)量的cDNA

	C_T values for IL12A （low expression）		C_T values for IL1RN （higher expression）
Input RNA （ng）	QIAGEN	Supplier A_II	QIAGEN	Supplier A_II
1000	30.9	32.0	23.1	24.9
100	34.2	35.4	26.3	26.6
10	37.8	46.8	29.7	30.3
1	N.D.	N.D.	32.4	34.5

應(yīng)用Real-time，兩步法RT-PCR 分析IL12A 和IL1RN，起始RNA量不同。應(yīng)用QuantiTect Reverse Transcription Kit 或來自供應(yīng)商Supplier A_II的試劑盒逆轉(zhuǎn)錄總 RNA 。在 ABI PRISM 7900 上應(yīng)用的QuantiTect Probe PCR Kit 、IL12A或 IL1RN的 QuantiTect Gene Expression Assays 分析合成的。應(yīng)用凱杰試劑盒C_T值較低，尤其中等豐度的基因IL12A（粗體），cDNA產(chǎn)量更高。N.D.：未檢測（Not detected）。

RT Primer Mix包含有特別優(yōu)化的oligo-dT和隨機(jī)引物的混合物，使cDNA合成可從RNA轉(zhuǎn)錄本的各個(gè)區(qū)域起始，甚至可從5'區(qū)域開始（見圖：“高靈敏度檢測12.5 kb 轉(zhuǎn)錄本5'區(qū)域的靶分子”）。相對于其他供應(yīng)商提供的試劑盒來說，QuantiTect Reverse Transcription Kit為real-time PCR分析提供高產(chǎn)量的cDNA，無需考慮待擴(kuò)增目標(biāo)序列位于轉(zhuǎn)錄本的哪個(gè)區(qū)域。同時(shí)，QuantiTect Reverse Transcription Kit也確保了real-time RT-PCR結(jié)果更好的重復(fù)性。

操作流程

使用QuantiTect逆轉(zhuǎn)錄試劑盒可在20分鐘內(nèi)去除基因組DNA和合成cDNA（見流程圖）。由于兩個(gè)反應(yīng)均在同一孵育溫度并使用預(yù)混液構(gòu)建反應(yīng)，因此操作過程快速且方便。相反，供應(yīng)商I提供的試劑盒操作需更多移液步驟且經(jīng)常需要調(diào)整孵育溫度，因此需要更長時(shí)間和更多手動操作。

應(yīng)用

QuantiTect Reverse Transcription Kit可從各種類型的起始樣品中合成cDNA以實(shí)現(xiàn)高效和高靈敏度的real-time RT-PCR，包括激光顯微切割樣品和活組織切片樣品。與其他供應(yīng)商提供的試劑相比，QuantiTect Reverse Transcription Kit在檢測低豐度基因時(shí)具有更高的靈敏度（見圖：“Real-Time，兩步法RT-PCR精確度更高”）。

為獲得高特異性和高靈敏度的real-time RT-PCR結(jié)果，又避免耗時(shí)的反應(yīng)步驟優(yōu)化過程，我們推薦QuantiTect Reverse Transcription Kit和其他QuantiTect產(chǎn)品聯(lián)合使用。包括經(jīng)優(yōu)化的PCR反應(yīng)預(yù)混液和即用型引物，使用SYBR Green染料法或序列特異性探針法進(jìn)行 real-time RT-PCR。