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辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記鼠抗人癌胚抗原單克隆抗體(檢測(cè))IgG

時(shí)間:2013-2-28閱讀:391
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辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記鼠抗人癌胚抗原單克隆抗體(檢測(cè))IgG

 

制備過(guò)程

1、免疫動(dòng)物 免疫動(dòng)物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠產(chǎn)生致敏B淋巴細(xì)胞的 過(guò)程。 一般選用6-8周齡雌性Balb/c小鼠,按照預(yù)先制定的免疫方案進(jìn)行免疫注射。 抗原通過(guò)血液循環(huán)或淋巴循環(huán)進(jìn)入外周免疫器官,刺激相應(yīng)B淋巴細(xì)胞克隆,使其活化、增殖,并分化成為致敏B淋巴細(xì)胞[

2、細(xì)胞融合 采用眼球摘除放血法處死小鼠,無(wú)菌操作取出脾臟,在平皿內(nèi)擠壓研磨,制備脾細(xì)胞懸液。 將準(zhǔn)備好的同系骨髓瘤細(xì)胞與小鼠脾細(xì)胞按一定比例混合,并加入促融合劑聚乙二醇。在聚乙二醇作用下,各種淋巴細(xì)胞可與骨髓瘤細(xì)胞發(fā)生融合,形成雜交瘤細(xì)胞。

3、選擇性培養(yǎng) 選擇性培養(yǎng)的目的是篩選融合的雜交瘤細(xì)胞,一般采用HAT選擇性培養(yǎng)基。在HAT培養(yǎng)基中,未融合的骨髓瘤細(xì)胞因缺乏次黃嘌呤-*-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶,不能利用補(bǔ)救途徑合成DNA而死亡。 未融合的淋巴細(xì)胞雖具有次黃嘌呤-*-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶,但其本身不能在體外長(zhǎng)期存活也逐漸死亡。 只有融合的雜交瘤細(xì)胞由于從脾細(xì)胞獲得了次黃嘌呤*磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶,并具有骨髓瘤細(xì)胞能無(wú)限增殖的特性,因此能在HAT培養(yǎng)基中存活和增殖。

4、雜交瘤陽(yáng)性克隆的篩選與克隆化 HAT培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的雜交瘤細(xì)胞,只有少數(shù)是分泌預(yù)定特異性單克隆抗體的細(xì)胞,因此,必須進(jìn)行篩選和克隆化。通常采用有限稀釋法進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞的克隆化培養(yǎng)。采用靈敏、快速、特異的免疫學(xué)方法,篩選出能產(chǎn)生所需單克隆抗體的陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞,并進(jìn)行克隆擴(kuò)增。經(jīng)過(guò)全面鑒定其所分泌單克隆抗體的免疫球蛋白類型、亞類、特異性、親和力、識(shí)別抗原的表位及其分子量后,及時(shí)進(jìn)行凍存。

Anti-α-AF/α-Afa/FITC  熒光素標(biāo)記α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶抗體IgG
Anti-AFP/FITC  熒光標(biāo)記鼠抗人甲胎蛋白單克隆抗體IgG
Anti-AFP/HRP  辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記鼠抗人甲胎蛋白單克隆抗體(包被)IgG
Anti-AFP/Biotin  *化鼠抗人甲胎蛋白單克隆抗體(包被)IgG
Anti-AFP/HRP  辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記鼠抗人甲胎蛋白單克隆抗體(檢測(cè))IgG
Anti-AFP/Biotin  *化鼠抗人甲胎蛋白單克隆抗體(檢測(cè))IgG
Anti-CEA/Gold  膠體金離子標(biāo)記鼠抗人癌胚抗原單克隆抗體(包被)IgG
Anti-CEA/HRP  辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記鼠抗人癌胚抗原單克隆抗體(包被)IgG
Anti-CEA/Biotin  *化鼠抗人癌胚抗原單克隆抗體(包被)IgG
Anti-CEA/Gold  膠體金離子標(biāo)記鼠抗人癌胚抗原單克隆抗體(檢測(cè))IgG
Anti-CEA/HRP  辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記鼠抗人癌胚抗原單克隆抗體(檢測(cè))IgG

 

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