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組織和細(xì)胞標(biāo)本的制備
*標(biāo)本制備恰當(dāng),是免疫組化成功的首要條件
*免疫組化對組織和細(xì)胞標(biāo)本的要求
-保持所檢標(biāo)本原有的結(jié)構(gòu)、形態(tài);
-在原位zui大程度地保持待測抗原(或抗體)的免疫活性,既不淬滅、流失或彌散,也不被隱蔽。
*免疫組化的組織和細(xì)胞標(biāo)本,制作流程與常規(guī)處理方法基本相同,但對組織、細(xì)胞的處理又有其特殊要求及注意事項。
-各種抗原由于其含量及特性的差異對標(biāo)本處理方式常有不同要求,因此要選擇適用于本實驗的*方法。
免疫組化中常用的組織和細(xì)胞標(biāo)本
*組織標(biāo)本
-石蠟切片
-冰凍切片
*細(xì)胞標(biāo)本
-組織印片
-細(xì)胞培養(yǎng)片(細(xì)胞爬片)
-細(xì)胞涂片
石蠟切片
*石蠟切片是制作組織標(biāo)本zui常用、zui基本的方法
-zui大優(yōu)點是組織形態(tài)保存好,且能作連續(xù)切片,有利于各種染色對照觀察;
-石蠟塊還能長期存檔,供回顧研究。
*石蠟切片制作過程對組織內(nèi)抗原顯現(xiàn)有一定的影響,但可通過某些措施予以改善,因而它是大多數(shù)免疫組化中的組織標(biāo)本制作方法。
1、取材的特殊要求及注意事項
*標(biāo)本新鮮:一般在2h以內(nèi)進(jìn)行,超過2h,組織將有不同程度的自溶,其抗原或變性消失,或嚴(yán)重彌散。
*取材部位:除取病灶或含待檢抗原部位外,還應(yīng)取病灶與正常交界處,即所取組織切片中同時應(yīng)有抗原陽性和陰性區(qū),以形成自身對照。
-細(xì)胞壞死后,不僅抗原彌散或消失,而且常引起非特異著色,干擾觀察,因此取材時應(yīng)盡可能避開壞死區(qū)。
1、取材的特殊要求及注意事項(續(xù))
*避免擠壓:取材時組織受擠壓可使邊緣部細(xì)胞形態(tài)改變并加深非特異著色,因而取材時應(yīng)使用鋒利的刀刃;
-鑷取組織動作要輕;
-經(jīng)窺鏡直接鉗取的組織往往有過度擠壓,觀察結(jié)果時應(yīng)有所考慮。
2、固定及常用的固定液
*取材后的組織需立刻投于固定劑中
-固定使組織和細(xì)胞的蛋白質(zhì)凝固,終止內(nèi)源性或外源性酶反應(yīng),防止組織自溶或異溶,以保持原有結(jié)構(gòu)和形態(tài);
-對免疫組化而言更有原位保存抗原的作用,避免抗原失活或彌散。
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