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禽血清IgG的分離與提純(Na2SO4法)
1.試劑
⑴ 5%葡聚糖硫酸鹽
⑵ 0.02Mol/L MnCl2溶液
⑶ *
⑷ pH8.2硼酸鹽緩沖液
⑸ 0.06Mol/L pH7.4PB液
2.操作方法
⑴ 取禽血清10ml加5%葡聚糖硫酸鹽液,0.40ml和0.025Mol/L MnCl21.00ml充分混合,靜置,然后離心去沉淀,此步目的是為了去掉脂類物質(zhì)。
⑵ 于上清液中加*使每毫升血清含0.18g,緩慢加入,混勻,靜置30min,3 000r/min離心去上清。
⑶ 以pH8.2硼酸鹽緩沖液將沉淀稀釋至原血清的一半再加硫酸鈉使成0.16g/ml,同上法離心去上清。
⑷ 重復(fù)步驟⑶,加Na2SO4,使成0.14g/ml。
⑸ 以少量硼酸鹽緩沖液溶解沉淀,然后裝透析袋除鹽48h。
⑹ 過SephadexG200柱,收集*峰和第二峰。*峰是IgM,第二峰主要是IgG。
⑺ 如要進一步提純,則用第二峰再過DEAE—纖維素柱,以0.06Mol/L pH7.4 PB液洗脫,洗脫下來的蛋白液即為IgG。肌動蛋白α抗體說明,Actin α抗體,α-SMA抗體
也可以按以下操作方法進行:
⑴ 以18%硫酸鈉(W/V)提取一次,再以14%的硫酸鈉提取一次。
⑵ 將粗提的免疫球蛋白以PBS溶解,按9%加入*,離心。再將上清按5%加入*,離心。將兩沉淀溶解、混合,在常水中透析過夜,再在生理鹽水中4℃透析,直至無SO42-為止。
⑶ 離心將上清液以pH8.0 0.20Mol/L PBS液平衡。
⑷ 過SephadexG200柱,以pH8.0 0.20Mol/L PBS液洗脫,收集洗脫液,取第二峰即為雞IgG。
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