腫瘤抑制基因抗體說明書，Anti-P53價格

細(xì)胞表面染色

1）   溶解血紅細(xì)胞。（注意：準(zhǔn)備足夠的細(xì)胞用于10份樣品100μl/份檢測）。

1ml全血加入14ml恢復(fù)至室溫的1×FCM溶解液（sc-3621）中。

輕輕混勻，室溫孵育3-5min。不要超過5min。

離心5min，棄上清，預(yù)冷的5ml 1×PBS輕輕重懸沉淀。

離心5min，棄上清，預(yù)冷的1ml 1×PBS輕輕重懸沉淀。

2）準(zhǔn)備培養(yǎng)細(xì)胞。（注意：本protocol通常處理50ml培養(yǎng)細(xì)胞。單層細(xì)胞，切勿*消化！用0.2%EDTA/PBS溶液代替。1×PBS洗細(xì)胞1次。）

*計數(shù)細(xì)胞。

1000rpm離心5min，棄上清，用足夠的1×PBS輕輕重懸沉淀至終濃度為1×10⁷細(xì)胞/ml。

每管加入100μl RBC溶解的全血或單細(xì)胞懸液?；靹?，放在有蓋的冰盒內(nèi)孵育15-30min。

每管加入1.5ml FCM沖洗緩沖液（sc-3624），顛倒混勻。1000rpm離心5min，棄上清，500μl 1%多聚甲醛重懸沉淀。

測讀分析數(shù)據(jù)。

50ml離心管收集細(xì)胞。2000rpm離心5min，棄上清。

室溫1×PBS 20ml重懸細(xì)胞。

細(xì)胞計數(shù)。

2000rpm離心5min除去PBS。4℃1×PBS洗1次。2000rpm離心5min除去PBS。

每10⁶個細(xì)胞加入1ml 4℃ FCM固定緩沖液（sc-3622），冰育15-30min。

4℃1×PBS洗細(xì)胞2次，離心，棄上清。

每10⁶個細(xì)胞加入1ml -20℃ FCM滲透緩沖液（sc-3623），逐滴加入混懸。冰育15min。

離心；4℃ FCM沖洗緩沖液（sc-3624）。

2000rpm離心5min，棄上清。每10⁷個細(xì)胞加入1ml FCM沖洗緩沖液，然后等分細(xì)胞（10⁶）至各待測管中。

細(xì)胞內(nèi)著染：各管加入熒光染料標(biāo)記的*抗體或isotype control。室溫避光孵育1hr。

24hrs內(nèi)檢測分析。