熒光素標(biāo)記tsg101抗體IgG，Anti-tsg101/FITC

Western Blot是將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應(yīng)抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產(chǎn)物，可通過融合部分的抗體檢測。蛋白質(zhì)樣品獲得：細菌誘導(dǎo)表達后，可通過電泳上樣緩沖液直接裂解細胞，真核細胞加勻漿緩沖液，機械或超聲波室溫勻漿0.5-1min。然后4℃，13,000g離心15min。取上清液作為樣品。

Bio-Rad微型凝膠電泳模具的安裝
帶上手套將凝膠電泳系統(tǒng)的前后玻璃板，梳子用去污劑洗滌，zui后再用去離子水沖洗干凈，除去黏附在玻璃板上凝固的膠和其他污垢。晾干玻璃板或用電吹風(fēng)吹干。將玻璃板的橡膠墊條用吸水紙吸干，然后按Bio-Rad Mini-Protean電泳系統(tǒng)的使用說明書安裝好玻璃板，固定于制膠板上

SDS-PAGE電泳
① 將抗原（細胞裂解液、重組蛋白）樣品置于凝膠加樣緩沖液中，在100℃加熱三分鐘以使蛋白質(zhì)變性。
② 設(shè)計加樣順序，作好實驗記錄，按預(yù)定順序加樣。一般每個電泳道加樣zui大體積為25µl,每個電泳道上樣的zui低蛋白質(zhì)量（每一條蛋白質(zhì)條帶）：0.1µg（考馬斯亮藍染色）-2ng（銀染色）,zui高蛋白質(zhì)量（蛋白質(zhì)混合物）：20-40µg。
③ 把電泳裝置與電源連接好，將電壓調(diào)至200V，電流應(yīng)流向陽極，待溴酚藍遷移到分離膠底部0.5cm處，關(guān)閉電源。
④ 從電泳裝置上卸下凝膠玻璃板，用去離子水沖洗干凈。準(zhǔn)備進行免疫印操作。