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456次熒光素標(biāo)記肺癌腫瘤阻抑基因1抗體IgG,Anti-TSLC1/FITC
1)免疫脾細(xì)胞的制備 制備單克隆抗體的動(dòng)物多采用純系 Balb/c小鼠。免疫的方法取決于所用抗原的性質(zhì)。免疫方法同一般血清的制備,也可采用脾內(nèi)直接免疫法。
2)骨髓瘤細(xì)胞的培養(yǎng)與篩選在融合前,骨髓瘤細(xì)胞應(yīng)經(jīng)過含8-AG的培養(yǎng)基篩選,防止細(xì)胞發(fā)生突變恢復(fù)HGPRT的活性(恢復(fù)HGPRT的活性的細(xì)胞不能在含8-AG的培養(yǎng)基中存活)。骨髓瘤細(xì)胞用10%小牛血清的培養(yǎng)液在細(xì)胞培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),融合前24h換液一次,使骨髓瘤細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。
3)細(xì)胞融合的關(guān)鍵:
1技術(shù)上的誤差常常導(dǎo)致融合的失敗。例如,供者淋巴細(xì)胞沒有查到免疫應(yīng)答。這必然要失敗的。
2融合試驗(yàn)zui大的失敗原因是污染,融合成功的關(guān)鍵是提供一個(gè)干凈的環(huán)境,以及適宜的無菌操作技術(shù)。
4)陽(yáng)性克隆的篩選應(yīng)盡早進(jìn)行。通常在融合后10天作*次檢測(cè),過早容易出現(xiàn)假陽(yáng)性。檢測(cè)方法應(yīng)靈敏、準(zhǔn)確、而且簡(jiǎn)便快速。具體應(yīng)用的方法應(yīng)根據(jù)抗原的性質(zhì),以及所需單克隆抗體的功能進(jìn)行選擇。常用的方法有 RIA法、 ELISA法和免疫熒光法等。其中ELISA法zui簡(jiǎn)便,RIA法zui準(zhǔn)確。陽(yáng)性克隆的篩選應(yīng)進(jìn)行多次,均陽(yáng)性時(shí)才確定為陽(yáng)性克隆進(jìn)行擴(kuò)增。
5)克隆化克隆化的目的是為了獲得單一細(xì)胞系的群體??寺』瘧?yīng)盡早進(jìn)行并反復(fù)篩選。這是因?yàn)槌跗诘碾s交瘤細(xì)胞是不穩(wěn)定的,有丟失染色體的傾向。反復(fù)克隆化后可獲得穩(wěn)定的雜交瘤細(xì)胞株??寺』姆椒ê芏啵鴝ui常用的是有限稀釋法。
Anti-TSLC1/FITC 熒光素標(biāo)記肺癌腫瘤阻抑基因1抗體IgG |
Anti-TSLP/FITC 熒光素標(biāo)記淋巴細(xì)胞生成素-1抗體IgG |
Anti-TTF-1/FITC 熒光素標(biāo)記甲狀腺核轉(zhuǎn)錄因子-1/甲狀腺特異增強(qiáng)子結(jié)合蛋白抗體IgG |
Anti-TTF-2/FITC 熒光素標(biāo)記甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子-2抗體IgG |
Anti-Tubb3/FITC 熒光素標(biāo)記β微管蛋白-Ⅲ抗體IgG |
Anti-Tubulin-α/FITC 熒光素標(biāo)記微管蛋白α抗體IgG |
Anti-Tubulin-β/FITC 熒光素標(biāo)記微管蛋白抗體IgG |
Anti-Tubulin-β/FITC 熒光素標(biāo)記微管蛋白抗體IgG |
Anti-β-Actin/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記β-肌動(dòng)蛋白(抗體) |
Anti-Tubulin-γ/FITC 熒光素標(biāo)記微管蛋白-γ抗體IgG |
Anti-VTG/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記兔抗魚、青鳉魚卵黃蛋白原抗體IgG |
Anti-Tumstatin/Col4a3/FITC 熒光素標(biāo)記腫瘤抑素抗體IgG |
Anti-TWIST protein/FITC 熒光素標(biāo)記TWIST轉(zhuǎn)錄因子蛋白抗體IgG |
Rabbit Anti-human Fibrinogen/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記兔抗人可溶性纖維蛋白原抗體IgG |
Anti-TY3H/FITC (Tyrosine Hydroxylase ) 熒光素標(biāo)記*羥化酶抗體IgG |
Anti-Tyrosinase/FITC 熒光素標(biāo)記*酶抗體IgG |
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