熒光素標(biāo)記突觸泡蛋白2A抗體IgG，Anti-SV2A/FITC

Western bloting要注意的一些問(wèn)題
1、為了讓實(shí)驗(yàn)更加嚴(yán)謹(jǐn)有說(shuō)服力都要設(shè)計(jì)對(duì)照實(shí)驗(yàn)，對(duì)照分為：陽(yáng)性對(duì)照（有標(biāo)準(zhǔn)品（比如β-actin，GAPDH）或陽(yáng)性血清）；陰性對(duì)照（測(cè)血時(shí)用相應(yīng)小鼠未免疫血清（即正常血）；空白對(duì)照（不加一抗，用PBS代替）；無(wú)關(guān)對(duì)照（用無(wú)關(guān)抗體）
2、一抗、二抗的濃度一般要參照抗體說(shuō)明書選擇zui適當(dāng)?shù)谋壤豢苟沟倪x擇直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果以及背景的深淺。
3、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí)所釆用的抗原批次要一樣，盡量的避免人為的帶來(lái)個(gè)體差異。特別在做裂解液時(shí)更要注意所釆用的操作條件，盡可能的排除可變因素給實(shí)驗(yàn)帶來(lái)不確定性。
4、凝膠的質(zhì)量直接影響以后的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，要特別注意幾點(diǎn)：凝膠要均一沒(méi)有氣泡；積層膠與分離膠界面要水平；AP和TEMED的量不能過(guò)多，太多會(huì)導(dǎo)致膠易脆裂；拔梳子時(shí)要快，盡量保證點(diǎn)樣孔平整。
5、電泳、轉(zhuǎn)膜時(shí)特別要注意正負(fù)極，電壓電流都不能過(guò)高；轉(zhuǎn)膜時(shí)“三明治”的疊放次序不錯(cuò)，同時(shí)要防止產(chǎn)生氣泡；盡量讓電轉(zhuǎn)溫度保持在10度以下，冰浴為宜。
6、封閉時(shí)一般在室溫下2h就夠了，但是要注意如果是*標(biāo)記的二抗就不宜用牛奶，因?yàn)榕Ｄ讨泻?，用BSA效果更好。
7、加一抗二抗要嚴(yán)格保證反應(yīng)時(shí)間，洗膜要注意盡可能地將一抗二抗洗凈，有利于降低背景；還要注意一抗二抗的匹配。
8、在顯色發(fā)光時(shí)要特別注意二抗所對(duì)應(yīng)的顯色方法，特別是在發(fā)光時(shí)要注意發(fā)光時(shí)間和顯影時(shí)間的控制，以看得清楚目的條帶為標(biāo)準(zhǔn)。