人急性單核細胞白血病單核細胞血清

1. 血清必須貯存于–20 ～ -70 oC，若存放于4 oC，請勿超過一個月。如果一次無法用完一 瓶，可將40～45 ml 分裝于無菌50 ml 離心管中，由于血清結(jié)凍時體積會增加約10 %， 必須預留此膨脹體積之空間，否則易發(fā)生污染或容器凍裂之情形。

2. 一般廠商提供之血清為無菌，不需再無菌過濾。若發(fā)現(xiàn)血清有許多懸浮物，則可將血清加 入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾，勿直接過濾血清。

3. 瓶裝（500ml） 血清解凍步驟（逐步解凍法）: -20 oC 或–70 oC 至4 oC 冰箱溶解一天，至室 溫下全溶后再分裝，一般以50 ml 無菌離心管可分裝40～45 ml。在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻（小心勿造成氣泡），使溫度與成分均一，減少沈淀的發(fā)生。勿直接由–20 oC 直接 至37 oC 解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沈淀。

4. heat-inactivation 是指56 oC, 30 分鐘加熱已*解凍之血清。加熱過程中須規(guī)則搖晃均勻。此熱處理之目的是使血清中之補體成份（complement） 去活化。除非必須，一般不建 議作此熱處理，因為會造成沈淀物之顯著增多，且會影響血清之品質(zhì)。補體參與之反應(yīng)有： cytolytic activities, contraction of smooth muscle, release of histamine from mast cells and plaets, enhanced phagocytosis, chemotaxis andactivation of lymphocytic and macrophage cell type。

5. 勿將血清置于37 oC 太久，若在37 oC 放置太久，血清會變得混濁，同時血清中許多較不穩(wěn)定之成份亦會因此受到破壞，而影響血清之品質(zhì)。

6. 血清之沈淀物

6.1. 凝絮物：發(fā)生之原因有許多種，但普遍之原因是血清中之脂蛋白（lipoprotein） 變性 及解凍后血清中存在之血纖維蛋白（fibrin） 造成，這些凝絮沈淀物不會影響血清本 身之品質(zhì)。若欲減少這些凝絮沈淀物，可用離心3000 rpm, 5 min 去除，或離心后上 清液可以加入培養(yǎng)基中一起過濾。不建議用過濾步驟去除這些凝絮沈淀物，因為會阻塞過濾膜。

6.2. 顯微鏡下觀察之“小黑點”：通常經(jīng)過熱處理之血清，沈淀物的形成會顯著的增多。 有些沈淀物在顯微鏡下觀察像是“小黑點”，常會誤認為血清遭受污染，而將血清放在37 oC 中欲培養(yǎng)此“微生物“，但在37 oC 環(huán)境下，又會使此沈淀物增多，更會誤認為微生物之增殖，但以培養(yǎng)細菌之培養(yǎng)基檢測，又沒有污染。一般而言，此 小黑點應(yīng)不會影響細胞之生長，但若懷疑此血清之品質(zhì)，應(yīng)立即停用，更換另一批 號的血清。