人胃腺癌細(xì)胞配制培養(yǎng)基之生長(zhǎng)測(cè)試

4.1. 材料：

4.1.1. MDCK cell （ATCC CCL-34 或CCRC 60004）

4.1.2. 6-well TC plate （or 35 mm TC dish）

4.1.3. methanol

4.1.4. glacial acetic acid

4.1.5. 10 % Giemsa solution （GibcoBRL 10092-013）

4.2. 步驟：

4.2.1. 以待測(cè)試培養(yǎng)基培養(yǎng)MDCK cell，接種MDCK 細(xì)胞于6-well plate （或35 mm TC dish） 中，每個(gè)well 接種1 × 102 活細(xì)胞，同時(shí)作對(duì)照組實(shí)驗(yàn)。

4.2.2. 接種5～7 天后，在100 倍倒立顯微鏡作觀(guān)察細(xì)胞群落之生長(zhǎng)，待細(xì)胞群 落大到可以肉眼觀(guān)察，而群落間不互相接觸時(shí)即可。

4.2.3. 去除培養(yǎng)基，加入1 ml Carnoy’s 固定液（甲醇：冰醋酸﹦ 3:1），室溫下靜置10 min。

4.2.4. 去除固定液，水洗二次。

4.2.5. 加入1 ml 10 % Giemsa solution，，室溫下靜置染色2-3 min。

4.2.6. 去除染液，水洗二次。

4.2.7. 以肉眼計(jì)數(shù)群落數(shù)，并比較之，若新配制或新批號(hào)的培養(yǎng)基對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)不佳，則丟棄之。

抗生素

1. 細(xì)胞庫(kù)之細(xì)胞培養(yǎng)基不加抗生素

1.1. 培養(yǎng)自ATCC 引進(jìn)之細(xì)胞株，培養(yǎng)基中不加抗生素。

1.2. 培養(yǎng)自其它實(shí)驗(yàn)室引進(jìn)之細(xì)胞株，制作token freeze 前培養(yǎng)基須添加抗生素，待 token freeze 通過(guò)污染測(cè)試后，大量培養(yǎng)時(shí)則不加抗生素。

2. 寄送活細(xì)胞時(shí)，須將培養(yǎng)液充滿(mǎn)整個(gè)flask 時(shí)，則須添加抗生素（penicillin 100 units/ml + streptomycin 100 ug/ml）。

3. 若要檢測(cè)mycoplasma，則培養(yǎng)基內(nèi)不可添加gentamicin，因gentamicin 會(huì)抑制mycoplasma 生長(zhǎng)。

4. 去除細(xì)菌污染之抗生素混合配方: penicillin 250 units/ml, streptomycin 250 ug/ml, neomycin 250 ug/ml, bacitracin 2.5 units/ml，注意混合使用后藥物毒性會(huì)增強(qiáng)。

5. 抗生素使用種類(lèi)與濃度：