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*ELISA試劑盒

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產(chǎn)品型號CFC006D

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更新時間：2018-03-05 06:45:43瀏覽次數(shù)：267次

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蘇州艾瑞德生物科技有限公司

經(jīng)營模式：生產(chǎn)廠家

商鋪產(chǎn)品：66條

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產(chǎn)品簡介

歡迎訪問公司：http://www.ardbio.cn 蘇州艾瑞德生物科技有限公司是一家*的生物科研產(chǎn)品與合同供應(yīng)商，是國內(nèi)專注于食品安全檢測、動物疫病檢測以及相關(guān)領(lǐng)域的高科技生產(chǎn)型企業(yè)。*以來，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定*，并與國內(nèi)的檢驗檢疫管理部門及*科研院所等機構(gòu)密切合作，研究開發(fā)*的檢測技術(shù)及產(chǎn)品。可面對大型檢驗檢測機構(gòu)和企業(yè)自有實驗室提供全系列產(chǎn)品和有效的。

詳細介紹

一、原理
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測水產(chǎn)和雞肉等組織樣本中的SEM，在微孔條上預(yù)包被上偶聯(lián)抗原，利用抗原與抗體的特異性免疫化學(xué)反應(yīng)的原理來進行的，樣本中的SEM和微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競爭抗*代謝物的衍生物抗體，加入酶標記物后，用TMB底物顯色，樣品中的SEM含量與樣品的吸光度值呈反比，與標準曲線比較即可得出*代謝物含量。

二、試劑盒技術(shù)指標：
試劑盒靈敏度： 0.1 ppb
樣本檢測下限：
組織、蜂蜜       0.2 ppb
魚/蝦等水產(chǎn)品組織因存在一定的干擾，檢測下限為0.3 ppb
回收率：
魚/蝦水產(chǎn)組織         85%±10%
蜂蜜/雞肉/肝臟樣本    75%±15%
交叉反應(yīng)率：
*代謝物        *
呋喃它酮代謝物       ﹤0.1%
*代謝物       ﹤0.1%
*代謝物       ﹤0.1%

三、試劑盒組成
1．微量測試孔：    96T/8孔
2．標準液：        0 ppb、0.1 ppb、0.3 ppb、0.9 ppb、2.7 ppb、8.1 ppb (1ml/瓶)
3．酶標記物：        12 mL
4．抗體濃縮液：       7 mL
5．底物緩沖液：       7 mL
6．底物液：           7 mL
7．終止液：           7 mL
8．20倍濃縮洗滌液：50 mL
9．復(fù)溶液：          50 mL
10．15.1 mg衍生化試劑

四、所用儀器、試劑
具備的儀器：微孔酶標儀、打印機、均質(zhì)器、氮氣吹干裝置、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平(感量0.01 g)
微量移液器：單道20 µL-200 µL，100 µL-1000 µL、多道250 µL
試       劑：氫氧化鈉、正己烷、濃HCl、*、甲醇、乙酸乙酯、亞硝基鐵 (K2Fe(CN)5·NO·3H2O)ZnSO4·7H2O

五、樣本前處理步驟
樣本處理前須知
處理任何樣本時，都必須注意：
(a)實驗中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時要更換吸頭。
(b)實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈，必要時可對實驗器具進行清潔，以避免污染干擾實驗結(jié)果。
樣本前處理需配制：
1．衍生化試劑稱15.1 mg鄰硝基苯甲醛加甲醇10 mL溶解(濃度10 mM)
2．C液：(供奶樣用)稱12.5 g亞硝基鐵用去離子水定溶至100 mL。
        D液：(供奶樣用)稱29.8 g   鋅用去離子水溶解定溶至100 mL。
3．0.1 MK2HPO4 稱22.8 g K2HPO4·3H2O    加去離子水溶解定溶至1 L
4．1 M HCl取8.6 mL濃HCl加水定溶至100 mL。
5．1 M NaOH稱取4 g NaOH加水定溶至100 mL。

樣本的處理
(a) 肉樣或魚蝦
用均質(zhì)器均質(zhì)樣本,接(d)的描述方法

(b) 奶樣
1．取出5 mL的奶樣本到玻璃離心管中，分別加入C液和D液各250 µL。
2．用振蕩器充分混合樣本，用恒溫離心機4000 r/min以上離心10 min(4-12 ℃).若沒有恒溫離心機，則先將樣本降溫至大約8 ℃,然后離心。
3．接(d)的描述方法。

(c) 蜂蜜
1．取1±0.05 g樣本到離心管中。
2．加入4 mL的去離子水溶解,再加入0.5 mL1 M HCl和100 µL衍生化試劑,充分振蕩。
3．接(d)第2步描述方法。

(d)接上面的方法
1．取1±0.05 g的均質(zhì)樣本(肉樣/魚蝦)、牛奶的離心上清液1.1 mL(相當1 mL奶樣)，分別加入4 mL的去離子水，0.5 mL 1 M HCl和100 µL衍生化試劑，充分振蕩。
2．置于56 ℃過夜孵育(大約2 h)。
3．分別加入5 mL 0.1 M K2HPO4，0.4 mL 1M NaOH和5 mL的乙酸乙酯，充分振蕩30 s；
4．在室溫下(20-25 ℃)4000 r/min以上離心10 min。
5．取出2.5 mL的乙酸乙酯到另一潔凈容器中于50 ℃氮氣/空氣吹干。
6．用1 mL正己烷溶解干燥物，用1mL已稀釋好的復(fù)溶液充分混合；在室溫下(20-25 ℃) 4000 r/min以上離心10 min。
7．取50 µL下層相用于分析。

樣本稀釋倍數(shù)：2

六、實驗操作步驟

1．將試劑盒從冷藏環(huán)境中取出并將所需試劑從試劑盒取出，置室溫(20-25 ℃)平衡30 min以上, 注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2．按需要取出微孔條及板架，將不用的微孔板重新密封，保存于2-8 ℃，不要冷凍。
3．加標準品/樣本50 µL /孔，然后加入抗體工作液50 µL/孔，再振蕩混勻，用封板膜蓋板，室溫反應(yīng)30 min。
4．洗板4-5次，每次浸泡30 s，拍干。
5．加入酶標記物100µl /孔，用封板膜蓋板，室溫反應(yīng)20 min。
6．洗板4-5次，每次浸泡30 s，拍干。
7．顯色：每孔加入底物緩沖液50 µL，再加底物液50 µL，輕輕振蕩混勻，室溫環(huán)境避光顯色10 min。
8．測定：每孔加入終止液50µL，輕輕振蕩勻，設(shè)定酶標儀于450 nm處(在20 min內(nèi)讀完數(shù)據(jù))，測定吸光度值。

七、結(jié)果判定
以標準品百分吸光率為縱坐標，以SEM標準品濃度(ng/ml)的半對數(shù)為橫坐標，繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中，從標準曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中SEM實際濃度。

八、注意事項
１．用前將所有試劑溫度回升至室溫20-25 ℃。
２．用之后立即將所有試劑放回2-8 ℃冰箱。
３．在ELISA分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的*性，仔細按照*的       洗板順序操作是ELISA測定程序中的要點。
４. 所有恒溫孵育過程中，避免光線照射，用蓋板膜封住微孔板。
５．試劑及標本沒有回到室溫(20-25 ℃)會導(dǎo)致所有標準的OD值偏低。
６．在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會伴隨著出現(xiàn)標準曲線不成線性，重復(fù)性       不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進行下一步操作?！　?br />７. 混合要均勻，否則會出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。
8. 反應(yīng)終止液為2 M ，避免接觸皮膚。
9. 不要使用過了有效日期的試劑盒，會引起靈敏度、OD值的變化。不要交換使用不同批號的盒中的試劑。
10. 不用的微孔板放進自封袋密封；標準物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
11. 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應(yīng)當棄之。0標準的吸光度值小于0.5時，表示試劑可能變質(zhì)。

九、儲藏條件和保質(zhì)期
儲藏條件：試劑盒于2-8 ℃保存，不要冷凍。
保質(zhì) 期：該產(chǎn)品有效期為1年，生產(chǎn)日期見包裝盒。