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紫外分光光度計(jì)的工作原理是什么?

閱讀:382      發(fā)布時(shí)間:2024-8-9
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  紫外分光光度計(jì)的工作原理主要基于朗伯-比爾定律(Lambert-Beer Law)。
 
  當(dāng)一束紫外或可見(jiàn)光通過(guò)含有吸光物質(zhì)的均勻溶液時(shí),部分光會(huì)被溶液中的吸光物質(zhì)所吸收,導(dǎo)致光強(qiáng)度減弱。
2.jpg
  吸光物質(zhì)對(duì)光的吸收程度與溶液中吸光物質(zhì)的濃度、光通過(guò)溶液的路徑長(zhǎng)度(通常稱為光程)以及吸光物質(zhì)對(duì)特定波長(zhǎng)光的吸收系數(shù)有關(guān)。
 
  具體來(lái)說(shuō),入射光強(qiáng)度(I?)與透過(guò)光強(qiáng)度(I)之間的關(guān)系可以用朗伯-比爾定律表示為:A = -log (I / I?) = ε × c × l ,其中 A 為吸光度,ε 為摩爾吸光系數(shù)(與物質(zhì)的性質(zhì)及入射光波長(zhǎng)有關(guān)),c 為溶液中吸光物質(zhì)的濃度,l 為光程。
 
  在紫外分光光度計(jì)中,光源發(fā)出連續(xù)的紫外-可見(jiàn)光,經(jīng)過(guò)單色器分光,得到特定波長(zhǎng)的單色光,然后照射到裝有樣品溶液的比色皿中。檢測(cè)器測(cè)量透過(guò)樣品溶液后的光強(qiáng)度,并與入射光強(qiáng)度進(jìn)行比較,從而計(jì)算出吸光度。
 
4.jpg
  通過(guò)改變?nèi)肷涔獾牟ㄩL(zhǎng),并測(cè)量不同波長(zhǎng)下的吸光度,就可以得到物質(zhì)的吸收光譜。根據(jù)吸收光譜的特征峰位置和強(qiáng)度,可以對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析。
 
  例如,在測(cè)定蛋白質(zhì)濃度時(shí),由于蛋白質(zhì)中的芳香族氨基酸在 280nm 波長(zhǎng)處有特定的吸收,通過(guò)測(cè)量該波長(zhǎng)下的吸光度,結(jié)合已知的摩爾吸光系數(shù)和光程,就可以計(jì)算出蛋白質(zhì)的濃度。
 

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