Millipore 提供了一種用于核酸應(yīng)用轉(zhuǎn)印膜選擇。 使用帶正電的 Immobilon-Ny+ 轉(zhuǎn)印膜可以在 Southern blotting，Northern blotting 和 colony/plaque lifts 實(shí)驗(yàn)中獲得出色的結(jié)果。 Immobilon-NC 轉(zhuǎn)印膜，是主要的 Southern 和 colony/plaque 實(shí)驗(yàn)方案中zui初使用的膜，也可作為一種靈敏度較低但更經(jīng)濟(jì)的選擇。
Immobilon-Ny+ 是一種帶正電的尼龍轉(zhuǎn)印膜，非常適合于可靠與可重現(xiàn)的轉(zhuǎn)移、固定、雜交及隨后的重復(fù)雜交實(shí)驗(yàn)。 其表面均一分布的正電荷密度確保得到zui高的靈敏度和zui低的背景信號(hào)。 此膜經(jīng)強(qiáng)化處理具有超長(zhǎng)的耐久性，這一點(diǎn)對(duì)于重復(fù)雜交試驗(yàn)至關(guān)重要。
可提供詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，在使用 Immobilon-Ny+ 轉(zhuǎn)印膜時(shí)可用于優(yōu)化轉(zhuǎn)印結(jié)果。
Southern Blotting
直接比較三種帶正電尼龍膜在各自優(yōu)化實(shí)驗(yàn)方案下的表現(xiàn)：每種膜在其推薦的紫外波長(zhǎng)照射下交聯(lián)。 Immobilon-Ny+ 轉(zhuǎn)印膜的雜交信號(hào)是其它兩種膜的 2 倍。
12 次重復(fù)雜交之后的信號(hào)強(qiáng)度
尼龍膜在 254 nm 交聯(lián)，并進(jìn)行了多次重復(fù)雜交，依次為：用 32P 標(biāo)記探針做 2 次雜交，4 次模擬雜交，用 32P 標(biāo)記探針做第 7 次雜交，然后進(jìn)行 5 次模擬雜交以及用 32P 標(biāo)記探針做第 13 次雜交。 在每個(gè)雜交周期之間，將膜置于 0.4M NaOH 溶液中，在 45°C 下洗提 30 分鐘。 模擬雜交與真實(shí)雜交*一樣，區(qū)別在于未加 32P 標(biāo)記探針。 在整個(gè)重復(fù)雜交過(guò)程中，Immobilon-Ny+ 的信號(hào)強(qiáng)度是競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)品 A 和 B 的兩倍。
檢測(cè)靈敏度
將凝膠上 DNA 的量減少到 0.01 ng。 0.1 lane（條帶）中的 2.2 和 2.0 kbp 帶分別與 DNA 的 0.48 和 0.42 pg 相對(duì)應(yīng)。 大約相當(dāng)于 10 µg 人類基因組 DNA 中一個(gè)單拷貝基因序列。 可通過(guò)對(duì)探針濃度加倍來(lái)提高靈敏度。 在 0.01 ng 條帶中，與競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)品 A 相比，Immobilon-Ny+ 轉(zhuǎn)印膜靈敏度稍高，而背景信號(hào)更低。
用化學(xué)發(fā)光檢測(cè)進(jìn)行 Northern Blotting
鼠肝的全部 RNA （1 µg） 在甲醛瓊脂糖凝膠中電泳分離，然后通過(guò)毛細(xì)作用轉(zhuǎn)印到 Immobilon-Ny+ 轉(zhuǎn)印膜和競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)品帶正電尼龍膜 “A”。 與烘焙相比，通過(guò)紫外交聯(lián)固定RNA 能增強(qiáng)信號(hào)。 Immobilon-Ny+ 轉(zhuǎn)印膜比競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)品 A 表現(xiàn)出更高的靈敏度。
Colony Lifts
將載有 pUC19 或 pLH2（2.0 kbp λ 噬菌體 DNA Hind III 片段克隆至 pUC19）的 JM109 混合細(xì)菌懸浮液置于瓊脂培養(yǎng)皿中，在 37°C 下培養(yǎng)過(guò)夜。 將培養(yǎng)皿在 4°C 下冷卻30 分鐘，將菌落（直徑大約 1– 2 mm）轉(zhuǎn)印至一片 82 mm 直徑的 Immobilon-Ny+ 圓片膜上，或轉(zhuǎn)印至競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)品帶正電的尼龍膜上。 膜上的 DNA 在 254 nm， 60,000 µJoules/cm2 紫外光照射下 交聯(lián)。 然后用 a 32P 標(biāo)記的 DNA 探針對(duì)膜進(jìn)行雜交，并使用磷屏成像系統(tǒng)顯色。
Immobilon-NC 轉(zhuǎn)印膜是一種經(jīng)濟(jì)型選擇，用于核酸和蛋白質(zhì)印跡實(shí)驗(yàn)方案。 這種轉(zhuǎn)印膜是 Southern、colony/plaque 以及蛋白質(zhì)實(shí)驗(yàn)方案中zui初使用的膜。 NC HATF 所含的混合纖維素酯基質(zhì)，不含在細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程中會(huì)干擾細(xì)胞壁完整性的表面活性劑。 這些膜用于 colony lifts。 NC HAHY 所含的混合纖維素酯基質(zhì)，所帶的表面活性劑能夠增強(qiáng)可濕性以及轉(zhuǎn)印過(guò)程中的處理能力。 兩種膜對(duì)核酸和蛋白質(zhì)都具有高吸附容量。 適用于常規(guī)轉(zhuǎn)印。
訂購(gòu)信息：
| 比較 | 目錄編號(hào) | 濾膜直徑，mm | 數(shù)量/包裝 | |
|---|---|---|---|---|
| INYC08250 | 82 | 50 | ||
| INYC08550 | 85 | 50 | ||
| INYC13250 | 132 | 50 | ||
| INYC13750 | 137 | 50 |
| 比較 | 目錄編號(hào) | 濾膜直徑，mm | 數(shù)量/包裝 | |
|---|---|---|---|---|
| HATF08250 | 82 | 50 | ||
| HATF08550 | 85 | 50 | ||
| HATF13250 | 132 | 50 | ||
| HATF13750 | 137 | 50 |
| 目錄編號(hào) | 濾膜直徑，mm | 數(shù)量/包裝 | ||
|---|---|---|---|---|
| HAHY08250 | 82 | 50 | ||
| HAHY08550 | 85 | 50 | ||
| HAHY13750 | 137 | 50 |
| 比較 | 目錄編號(hào) | 濾膜尺寸，cm x cm | 數(shù)量/包裝 | |
|---|---|---|---|---|
| INYC61150 | 6 x 11 | 50 | ||
| INYC09120 | 9 x 12 | 10 | ||
| INYC10100 | 10 x 10 | 10 | ||
| INYC15150 | 15 x 15 | 10 | ||
| INYC20200 | 20 x 20 | 10 | ||
| INYC22220 | 22.2 x 22.2 | 10 | ||
| INYC2222C | 22.2 x 22.2 | 100 | ||
| INYC26260 | 26 x 26 | 10 | ||
| INYC00010 | 30 x 330 | 1 |
| 比較 | 目錄編號(hào) | 濾膜尺寸，cm x cm | 數(shù)量/包裝 | |
|---|---|---|---|---|
| HAHY304F0 | 30 x 30 | 10 | ||
| HATF00010 | 33 x 300 | 1 |
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