釀酒酵母感受態(tài)細(xì)胞的制備
（1）從YPD平板上挑取一個(gè)新鮮的釀酒酵母EBY100單克隆至10 ml YPD液體培養(yǎng)基，30℃，250 rpm 培養(yǎng)過(guò)夜。
（2）測(cè)定過(guò)夜培養(yǎng)物的OD600值為3.0~5.0之間。
（3）將10 ml YPD過(guò)夜培養(yǎng)物稀釋至OD600值為0.2~0.4。
（4）在28~30℃搖床中繼續(xù)培養(yǎng)3~6 hr，使其OD600值達(dá)到0.6~1.0。
（5）于室溫1500 g 離心5 min 收集酵母細(xì)胞，棄上清。
（6）用10 ml 洗液洗酵母細(xì)胞，隨后于室溫1500 g 離心5 min離 心收集細(xì)胞，棄上清。
（7）用1 ml TE/LiAc重懸酵母細(xì)胞，以每管50 μl 分裝。
釀酒酵母細(xì)胞的轉(zhuǎn)化
（1）取50 μl 感受態(tài)細(xì)胞，再加入待轉(zhuǎn)質(zhì)粒各2 μl，混勻。
（2）加入500 μl 轉(zhuǎn)化用溶液（PEG/LiAc，二甲亞砜），彈擊管壁混勻。
（3）30℃水浴1 h，隔15min彈擊管壁混勻。
（4）加入1毫升YPD培養(yǎng)液，30℃搖床培養(yǎng)1小時(shí)。
（5）3500 g 離心5 min ，留沉淀，棄上清。
（6）沉淀用150 μl TE重懸，涂相應(yīng)的SD平板；將平板倒置于30℃培養(yǎng)。
會(huì)員.png)
15
立即詢價(jià)
您提交后，專屬客服將第一時(shí)間為您服務(wù)