本試劑盒只能用于科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷
小鼠（Mouse）糖化血紅蛋白A1c（GHbA1c）ELISA檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
檢測(cè)原理
試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。用純化的抗體
包被微孔板，制成固相載體，往包被抗糖化血紅蛋白A1c（GHbA1c）
抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)徹
底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，
并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的糖化血
紅蛋白A1c（GHbA1c）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸
光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。
樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞
刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地
分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘
取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于
-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品
1. 酶標(biāo)儀（450nm）
2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
操作注意事項(xiàng)
1. 試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20 分鐘。從冰箱取出的
濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶*溶解
后再使用。2. 標(biāo)準(zhǔn)品臨使用時(shí)再稀釋，稀釋后用剩的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)立刻丟棄，不可
保存。
3. 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。
4. 嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。
5. 所有液體組分使用前充分搖勻。
試劑盒組成
名稱96孔配置48孔配置備注
微孔酶標(biāo)板12 孔×8 條12 孔×4 條無(wú)
標(biāo)準(zhǔn)品（400ng/mL） 0.5mL 0.5mL 按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋
樣本稀釋液6mL 3mL 無(wú)
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液6mL 3mL
檢測(cè)抗體-HRP 6mL 3mL 無(wú)
20×洗滌緩沖液25mL 15mL 按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋
底物A 6mL 3mL 無(wú)
底物B 6mL 3mL 無(wú)
終止液6mL 3mL 無(wú)
封板膜2 張2 張無(wú)
說(shuō)明書(shū)1 份1 份無(wú)
自封袋1 個(gè)1 個(gè)無(wú)
試劑的準(zhǔn)備
1. 標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品（400ng/mL）在實(shí)驗(yàn)前用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液進(jìn)行倍比
稀釋，得到6 個(gè)濃度點(diǎn)（包括標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)）：400、200、100、50、25、
12.5 ng/mL
2. 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20 稀釋。
洗板方法
1. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min 后甩盡
孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板4-5 次。
2. 自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板4-5 次。
操作步驟
1. 從室溫平衡20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條密封放
回4℃。
2. 除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；待測(cè)樣本
孔中先加入待測(cè)樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL（即樣本稀釋5
倍）；隨后標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)
記的檢測(cè)抗體50μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫
育50min。3. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去
洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5 次（也可用洗板機(jī)按說(shuō)明
書(shū)操作洗板）。
4. 每孔加入底物A、B 各50μL，輕輕振蕩混勻，37℃避光孵育15min。
5. 每孔加入終止液50μL，15min 內(nèi)，在450nm 波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的
OD 值。
結(jié)果判斷
1. 每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣本的OD 值應(yīng)減去空白孔的OD 值。
2. 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在Excel 工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對(duì)
應(yīng)OD 值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，按曲線方程計(jì)算各
樣本濃度值，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣本濃度。
試劑盒性能
1. 準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R 值，大于等于
0.9900。
2. 靈敏度：zui低檢測(cè)濃度小于6 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。
3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
4. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。
5. 檢測(cè)范圍：0-400ng/mL
6. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。
7. 有效期：6 個(gè)月
免責(zé)聲明
1. 試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn)，否則所
產(chǎn)生的一切后果，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)，本公司概不負(fù)責(zé)。
2. 嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作，實(shí)驗(yàn)者違反說(shuō)明書(shū)操作，后果由實(shí)驗(yàn)者
承擔(dān)。