說明
本測試盒用間接競爭免疫分析法定量測定玉米中的伏馬菌素B1（FB1）。該測試盒反應(yīng)孔可拆卸，可測單份樣品，也可測多份樣品，定量分析時需有微孔板酶標儀。
一、概要
FB1是由串珠鐮刀菌產(chǎn)生的真菌毒素，主要污染玉米及其制品。可誘發(fā)馬的腦白質(zhì)軟化癥和豬的肺水腫綜合癥。FB1對多種動物有腎臟毒性、肝臟毒性作用，對大鼠肝細胞和雞巨噬細胞有細胞毒性。據(jù)報道，FB1與食管癌發(fā)病率有明顯相關(guān)性，癌癥研究中心把FB1劃分到2B組，即人類可能的致癌物。因此FB1對人類健康和畜牧業(yè)發(fā)展構(gòu)成潛在威脅，成為繼黃曲霉毒素后的又一個研究熱點。
目前檢測糧食和飼料中FB1的儀器方法有液相色譜、氣相色譜、質(zhì)譜和毛細管電泳法等，這些方法靈敏度較高，結(jié)果穩(wěn)定，但所需儀器設(shè)備昂貴，樣品準備耗時長，不適于大量樣品的篩選。本試劑盒是以應(yīng)用單克隆抗體為基礎(chǔ)的ELISA檢測方法，可以準確快速檢測玉米中的FB1。
二、技術(shù)指標
靈敏度：
試劑盒的靈敏度為10 ppb。
變異系數(shù)：
試劑盒條內(nèi)變異＜10%，條間變異＜15%。
回收率：
回收率為70%~120%。
檢測范圍：
試劑盒zui低檢出濃度為10ng/mL，校正曲線的線性范圍10ng/mL~200ng/mL。
交叉反應(yīng)：
交叉反應(yīng)系數(shù)小于1%。
三、測定原理
本試劑盒用固相酶聯(lián)免疫吸附原理，利用間接競爭ELISA法進行測定。用抗原包被微孔板，加入FB1標準品或樣品、FB1單克隆抗體進行孵育后，將未與包被抗原結(jié)合的抗體洗去；再加入酶標記的抗鼠IgG抗體（酶標物）孵育，加入顯色液顯色，經(jīng)終止液終止后，用酶標儀在450nm處測定OD值。
四、提供的物品
微孔板…………… 包被有FB1-BSA
5個濃度的FB1標準溶液（各0.5mL）：
標準1：0ng/mL ……………... 直接使用
標準2：10ng/mL …………直接使用
標準3：50ng/mL …………直接使用
標準4：100ng/mL……………直接使用
標準5：200ng/mL……………直接使用
抗F B1單克隆抗體溶液（6mL）..直接使用
酶標物（12mL） ……………….直接使用
顯色液（12mL） ……………….直接使用
終止液（6mL） ……………….直接使用
濃縮洗液（30mL） ……………….稀釋使用
五、盒中未提供，需自備物品
【儀器】微孔板酶標儀（可于450nm處測定）、振蕩器、粉碎機、微量移液器
【耗材】量筒、漏斗、容量瓶、快速定性濾紙
【試劑】氯化鈉（分析純）、甲醇（分析純）、純水、去離子水或蒸餾水
六、操作者注意事項
⒈標準溶液中含有FB1，應(yīng)特別小心。
⒉終止液含有硫酸，避免接觸皮膚。
⒊每次加樣后立即將所有試劑放回2~8℃。
⒋每步加樣時間應(yīng)控制在5min內(nèi)。
⒌孵育過程中應(yīng)避光。
⒍不要使用過期試劑盒。
⒎不要交叉使用不同批號的試劑盒中的試劑。
七、儲存條件
⒈保存試劑盒于2~8℃。不要冷凍。
⒉顯色液對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
⒊將不用的微孔板放進原鋁箔袋中，置2~8℃保存。
八、試劑變質(zhì)的標志
標準1的吸光度值小于0.5個單位（A450nm<0.5）時，表示試劑可能變質(zhì)。
九、樣品處理程序
⒈樣品應(yīng)當保存在陰涼避光之處及冷藏保存。
⒉取5g粉碎的有代表性的樣品，加1.25g氯化鈉及25mL70%（體積比）甲醇-水溶液。
⒊強力振蕩3分鐘。
⒋用快速定性濾紙過濾。
⒌取1mL濾液，加1%氯化鈉溶液9mL進行稀釋。
⒍取50μL稀釋液進行分析。
⒎根據(jù)需要可以增減樣品量，但甲醇-水溶液的量也應(yīng)相應(yīng)增減。
樣本稀釋倍數(shù)：50倍
十、酶免疫分析程序
⒈濃縮洗液為10倍濃縮液，使用時與純水、去離子水或蒸餾水按體積比1:9稀釋后使用。
⒉取所需數(shù)量的板條插入微孔架，用洗液洗滌微孔板3min×2次。
⒊加入50mL標準品或處理好的樣品到微孔，記錄樣品及標準的位置，每個標準和樣品必須使用新的吸頭。
⒋加入50mL抗體溶液到每個微孔（注意移液器管尖不要接觸到孔中的液體，避免交叉污染）中，37℃孵育90min。
⒌甩掉孔中液體，用洗液洗滌微孔板3min×3次，zui后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以*除去孔中液體。
⒍每孔加入酶標物100mL，37℃孵育60min。
⒎用洗液洗滌微孔板3min×5次，zui后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以*除去孔中液體。
⒏每孔加入顯色液100mL，37℃孵育15min。
⒐每孔加入終止液50mL，立即用酶標儀在波長450nm處測定吸光度值（OD值）。
十一、樣品濃度計算
以標準溶液OD值與標準1 OD值的比值為縱坐標，所對應(yīng)標準溶液濃度（ng/mL）的對數(shù)值為橫坐標，制作標準曲線。根據(jù)樣品OD值與標準1OD的比值，可從曲線上得到對應(yīng)點的橫坐標，即為FB1濃度的對數(shù)值，求得反對數(shù)即為測定液中FB1濃度C（ng/mL），按下列公式計算出樣品中FB1含量：
FB1含量（mg/kg）= C×K
式中：
C：稀釋后樣品提取液中FB1含量（ng/mL）
K：樣品稀釋倍數(shù)（按照本說明書中樣品處理程序方法為50）
