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雞新城疫病毒IgG抗體Elisa檢測(cè)試劑盒

時(shí)間：2012/3/9閱讀：984

【產(chǎn)品簡(jiǎn)介】

新城疫（Newcastle disease,ND）又名為雞瘟，是目前危害我過(guò)養(yǎng)殖業(yè)的主要禽流感業(yè)的主要禽流感傳染病之一，主要侵害雞，火雞，其他禽類和野雞類，引起呼氣道感染及免疫抑制，多年來(lái)一直在各類禽類群中廣泛存在，雖然有疫苗進(jìn)行免疫接種，但免疫雞群仍然發(fā)病，給養(yǎng)禽業(yè)造成了巨大損失。

【使用意義】

①本產(chǎn)品用于雞血清抗體的檢測(cè)，以確定被檢雞是否感染過(guò)雞新城疫病毒或免疫雞體內(nèi)抗體水平。

②評(píng)估雞群感染ND的風(fēng)險(xiǎn)程度。

③了解雛雞母源抗體水平，為ND免疫程序的制定提供參考。

【檢測(cè)原理】

本品系由包被新城疫病毒的微孔板和酶標(biāo)記抗雞IgG及其他試劑組成，應(yīng)用酶免間接法原理（ELISA）檢測(cè)雞血清或血漿中新城疫病毒IgG抗體。

【試劑盒組成】

1.	雞傳染性支氣管炎病毒抗原包被微孔板條	96T×1
2.	酶標(biāo)記物	11ml×1
3.	樣品稀釋液	20ml×1
4.	顯色劑A	7 ml×1
5.	顯色劑B	7 ml×1
6.	洗滌液（用前1：25稀釋）	10 ml×2
7.	抗體陽(yáng)性對(duì)照血清	0.6 ml×1
8.	抗體陰性對(duì)照血清	0.6 ml×1
9.	終止液	7 ml×1
10.	封板膜	3
11.	密封袋	1個(gè)
12.	說(shuō)明書(shū)	1份

【使用方法】

1. 使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復(fù)至室溫。

2. 取所需用量包被微孔板條，設(shè)空白、陰性及陽(yáng)性對(duì)照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。

3. 陰性、陽(yáng)性對(duì)照孔分別加陰性、陽(yáng)性對(duì)照血清100μl；空白對(duì)照孔不加；樣品稀釋，血清每孔樣本先1：50稀釋后加100μl；蛋黃以1:100稀釋后每孔加100ul。

4. 混勻，置37℃溫浴30分鐘。

5. 扣去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置60秒后棄去，重復(fù)洗滌5次，拍干。

6. 每孔加酶標(biāo)記物100μl（空白孔除外）。

7. 置37℃溫浴30分鐘。

8. 洗滌，同步驟5。

9. 每孔依次加顯色劑A、顯色劑B各50μl，混勻，37℃避光反應(yīng)10分鐘。

10. 每孔加終止液50μl，混勻，置酶標(biāo)儀450nm處測(cè)各孔A值（建議用雙波長(zhǎng)450nm、630nm）。

【結(jié)果判定】

1. 陰性對(duì)照：正常情況下，陰性對(duì)照孔A值≤0.1；

2. 陽(yáng)性對(duì)照：正常情況下，陽(yáng)性對(duì)照孔A值≥0.4；

3. 結(jié)果判定：

3.1 未曾免疫

臨界值（C.O.）的計(jì)算：臨界值=0.15+陰性對(duì)照孔均值；檢測(cè)標(biāo)本A₄₅₀值≥臨界值判定為本試驗(yàn)陽(yáng)性；檢測(cè)標(biāo)本A₄₅₀值＜臨界值判定為陰性。所有陰性、陽(yáng)性對(duì)照和樣品的A值均須減去空白平均值后作為計(jì)算值；陰性對(duì)照孔A值大于0.10時(shí)應(yīng)舍棄，如所有陰性對(duì)照孔A值都大于0.10時(shí)須重復(fù)實(shí)驗(yàn)；陰性對(duì)照孔低于0.05時(shí)以0.05計(jì)算。

3.2 免疫雞群

檢測(cè)樣本A₄₅₀值≥0.45即血凝滴度≥6log2時(shí)有很好的保護(hù)；

0.45> A₄₅₀≥0.2時(shí)相應(yīng)血凝滴度為5log2；

0.3> A₄₅₀≥0.2時(shí)相應(yīng)血凝滴度為4log2，有一定保護(hù)力；

當(dāng)A₄₅₀≤0.3時(shí)，建議加強(qiáng)免疫。

【注意事項(xiàng)】

1. 操作時(shí)必須戴手套，穿工作衣，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度。

2. 試驗(yàn)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

3. 樣品稀釋液應(yīng)用加液器加注，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性。

4. 洗滌時(shí)各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。

5. 所有樣品洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

6. 微孔板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)在室溫中平衡至潮氣干盡后方可，未用完的微孔板須放入有干燥劑的密封袋中保存。

7. 用于檢測(cè)的樣品應(yīng)保持新鮮。

8. 剩余樣品及廢棄物應(yīng)經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘，或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄。

9. 不同批號(hào)試劑組分不得混用。

【保存與有效期】

于2～8℃避光保存，有效期自成品檢定合格之日起為12個(gè)月。

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