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技術(shù)文章

液相色譜儀的使用維護(hù)

閱讀:619發(fā)布時(shí)間:2013-6-4

 1.液相色譜柱的維護(hù):我們在使用新的色譜柱應(yīng)該在我們自己的液相色譜儀上進(jìn)行性能測試,即使用色譜柱附帶的檢驗(yàn)報(bào)告上測試條件和樣品來測定該色譜柱的柱效。并且,在以后的使用中,應(yīng)時(shí)常對色譜柱進(jìn)行測試。而且在使用的過程中常常有堵塞的現(xiàn)象,造成這種現(xiàn)象的主要原因是溶劑中的不溶物樣品中的不溶物泵進(jìn)樣器等中的不溶物柱內(nèi)不溶物的形成等。如果當(dāng)色譜柱堵塞以后我們可以對色譜柱進(jìn)行修復(fù),首先,使用含鹽緩沖液后如離子對試劑應(yīng)用溶解性強(qiáng)的溶劑如水進(jìn)行沖洗。其次,先斷開檢測器,然后用對來自樣品中的物質(zhì)有強(qiáng)溶解性的溶劑進(jìn)行沖洗,對于反相色譜柱,可使用甲 醇、乙睛、四氫呋喃、氯仿、庚烷等,在此條件下,應(yīng)避免溶劑的pH低于2或高于8。zui后如果經(jīng)過上述還是沒有修復(fù),色譜柱壓力還是沒有下降,則要斷開檢測 器,將色譜柱反方向放置,然后檢查柱壓,若壓力穩(wěn)定下降,則保持色譜柱反方向連接,用低于0.5ml/min流速沖洗一小時(shí)。如果壓力不下降,則要看內(nèi)置 過濾器是否被堵塞,如果被堵塞應(yīng)沖洗或更換,若進(jìn)口端的填料發(fā)生堵塞,柱子將不可能被*恢復(fù),只能通過去掉進(jìn)口端的部分填料,重新填充進(jìn)行有限的柱效恢 復(fù)。而且修復(fù)的厚度是2-5mm。


2.液相色譜柱的保養(yǎng):色譜柱在使用前,進(jìn)行柱的性能測試,并將結(jié)果保存起來,作為今后評價(jià)柱性能變化的參考。但要注意:柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同;另外,在做柱性能測試時(shí)是按照色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行出廠測試所使用的條件是*條件,只有這樣,測得的結(jié)果才有可比性。我們在對色譜柱使用前進(jìn)行測試以后,我們要根據(jù)不同的情況對色譜柱進(jìn)行保養(yǎng):反相色譜柱每天實(shí)驗(yàn)后的保養(yǎng):使用緩沖液或含鹽的流動相,實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)用10%的甲醇/水沖洗30分鐘,洗掉色譜柱中的鹽,再用甲醇沖洗30分鐘。注意:不能用純水沖洗柱子,應(yīng)該在水中加入10%的甲醇,防止將填料沖塌陷。長期保存色譜柱:如色譜柱要長時(shí)間保存,必須存于合適的溶劑下。對于反相柱可以儲存于純甲醇或乙腈中,正相柱可以儲存于嚴(yán)格脫水后的純正己烷中,離子交換柱可以儲存于水含防腐劑*或柳硫汞中,并將購買新色譜柱時(shí)附送的堵頭堵上。儲存的溫度是室溫
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3液相色譜柱的維護(hù)與保養(yǎng)在液相色譜儀中的應(yīng)用:液相色譜(HPLC)20世紀(jì)60年代后期發(fā)展起來的分離分析技術(shù),是現(xiàn)代分離測定的重要手段。問世以來,因其具有分離效能高、分析速度快、檢測靈敏度好、能分析高沸點(diǎn)但不能氣化的熱不穩(wěn)定生理活性物質(zhì)的特點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)、藥物及臨床分析。液相色譜柱[/url]是消耗品,會隨使用時(shí)間或進(jìn)樣的次數(shù)增加,出現(xiàn)色譜峰高降低,峰寬加大或出現(xiàn)肩峰,柱效下降。需要定期進(jìn)行*清洗和再生,不同的色譜柱清洗方法各不相同比如:
3.1反相柱分別用甲醇:=90:10,純甲醇(HPLC,異丙醇(HPLC,二氯甲烷(HPLC等溶劑作為流動相,依次沖洗,每種流動相流經(jīng)色譜柱不少于20倍的色譜柱體積.然后再以相反的次序沖洗。3.2正相柱分別用正己烷(HPLC,異丙醇(HPLC,二氯甲烷(HPLC,甲醇(HPLC等溶劑做流動相,順次沖洗,每種流動相流經(jīng)色譜柱不少于20倍的柱體積異丙醇粘度大,可降低流速,避免壓力過高).注意使用溶劑的次序不要顛倒,用甲醇沖洗完后,再以相反的次序沖洗至正己烷,所有的流動相必須嚴(yán)格脫水。3.3離子交換柱長時(shí)間在緩沖溶液中使用和進(jìn)樣,將導(dǎo)致色譜柱離子交換能力下降,用稀酸緩沖溶液沖洗可以使陽離子柱再生,反之,用稀堿緩沖溶液沖洗可以使陰離子柱再生。


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