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活化 Ras Pull-Down 和檢測試劑盒

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產(chǎn)品型號Thermo Scientific

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更新時間：2023-08-07 22:20:42瀏覽次數(shù)：174次

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產(chǎn)品簡介

活化 Ras Pull-Down 和檢測試劑盒

詳細(xì)介紹

Thermo Scientific 活化 Ras 沉降和檢測試劑盒能夠通過與 Raf1 蛋白結(jié)合結(jié)構(gòu)域的特異性蛋白相互作用選擇性地富集和檢測 GTP 結(jié)合 Ras GTPase。

活化 Ras 沉降和檢測試劑盒包含純化的 GST-Raf1 Ras 結(jié)合結(jié)構(gòu)域 (RBD)、瓊脂糖樹脂、陽性和陰性對照品（分別為 GTPγS 和 GDP）、裂解/結(jié)合/洗滌緩沖液、抗 Ras 抗體、SDS 樣品緩沖液、離心柱和收集管。該試劑盒使用 NIH 3T3 細(xì)胞的裂解物進(jìn)行驗(yàn)證，已知該細(xì)胞系具有穩(wěn)健的 Ras 活性。

活化 Ras 沉降和檢測試劑盒的特點(diǎn)：

?高靈敏度和精確度—優(yōu)化試劑、特異性抗 Ras 抗體和 Western 印跡程序可確保精確控制和半定量結(jié)果
?經(jīng)驗(yàn)證—對 Ras 檢測進(jìn)行功能檢測，以確保質(zhì)量和性能
?兼容—可有效兼容小鼠、大鼠和人類來源的多種細(xì)胞類型

應(yīng)用：
?追蹤細(xì)胞分化、遷移、分裂和細(xì)胞骨架重排期間的 Ras GTPase 活化
? 研究活化 Ras 在癌癥和血管新生中的作用
?監(jiān)測使用生長因子刺激后的 Ras 活性
?篩查小分子抑制劑對 Ras 活性的影響

使用經(jīng)用于活化內(nèi)源性 Ras 的 GTPγS 處理的細(xì)胞裂解物相對于經(jīng)滅活小 GTPase 的 GDP 處理的裂解物，驗(yàn)證了活化 Ras 沉降和檢測試劑盒的活化 Ras 富集方法的功能和特異性。GTPγS 處理捕獲 GTP 結(jié)合活化形式的 Ras，在存在內(nèi)源性 Ras 時產(chǎn)生強(qiáng)烈信號。GDP 處理使 Ras 進(jìn)入 GDP 結(jié)合的非活化狀態(tài)，無論 Ras 蛋白水平如何均幾乎不產(chǎn)生信號。對該試劑盒進(jìn)行了優(yōu)化，用于使用 HRP 偶聯(lián)二抗（山羊抗小鼠 IgG，產(chǎn)品編號 31430）和 Thermo Scientific SuperSignal West Pico 化學(xué)發(fā)光底物（產(chǎn)品編號 34080）進(jìn)行 Western 印跡檢測。每個試劑盒均包含足夠用于 30 次沉降實(shí)驗(yàn)的組成部分。

試劑盒組成部分也可用于免疫熒光染色。使用 NGF 刺激神經(jīng)元 NS-1 細(xì)胞，以使用試劑盒中提供的 GST-RBD 蛋白和抗 Ras 抗體研究活化 Ras 的空間分布。

Ras 背景：
以大鼠肉瘤病毒致癌基因命名的 GTPase 的 Ras 超家族包含多種 Ras 同源異構(gòu)體，包括 K-Ras、H-Ras 和 N-Ras。雖然三種同源異構(gòu)體在不同細(xì)胞類型中的表達(dá)水平有所不同，但是一般而言，在所有癌癥中 ～15% 存在這些同源異構(gòu)體中至少一種的激活突變。Ras 蛋白作為來自細(xì)胞外分子的細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的啟動物，通過羧基端脂質(zhì)修飾和異戊烯化與質(zhì)膜相連接。這些羧基端的修飾決定了 Ras 在不同膜微結(jié)構(gòu)域的定位，從而決定后續(xù)的下游信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。Ras 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路影響多種細(xì)胞過程，包括增殖、存活、囊泡運(yùn)輸和基因表達(dá)。

通過 Ras 進(jìn)行的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)對多種細(xì)胞反應(yīng)至關(guān)重要，且 Ras 的活化受到 GEF 和 GAP 蛋白的調(diào)控。GEF 蛋白通過將 GDP 從非活化 Ras 中解離來介導(dǎo) GTPase 活化，以使 Ras 結(jié)合到 GTP 上。相反，GAP 蛋白通過將 GTP 水解為 GDP 滅活 GTPase。Ras 通過與效應(yīng)蛋白（包括 Raf 和 PI3 激酶）相互作用來介導(dǎo)下游信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。Raf1 是一種/蛋白激酶，是 MAP 激酶激酶信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的一部分，該通路可活化 ERK 和 p38，從而影響增殖和存活。PI3 激酶信號轉(zhuǎn)導(dǎo)可使 AKT 和 mTOR 活化，這對細(xì)胞生長和存活至關(guān)重要。Ras 也是細(xì)胞分化和發(fā)育（包括免疫細(xì)胞發(fā)育和功能）的組成部分。

更多產(chǎn)品數(shù)據(jù)
?通過特異性下游效應(yīng)子測定小 GTPase 的激活
?在神經(jīng)元細(xì)胞分化過程中檢測和定位活性 GTPase

For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.


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