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mMESSAGE mMACHINE™ T7 ULTRA 轉(zhuǎn)錄試劑盒

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mMESSAGE mMACHINE™ T7 ULTRA 轉(zhuǎn)錄試劑盒

詳細(xì)介紹

mMESSAGE mMACHINE® T7 Ultra 試劑盒結(jié)合了新的帽類(lèi)似物、抗反向帽類(lèi)似物 (ARCA) 和獲得的高得率轉(zhuǎn)錄技術(shù)，以生成 RNA 轉(zhuǎn)錄本，與翻譯后其他轉(zhuǎn)錄本相比可獲得更高的蛋白質(zhì)得率。mMESSAGE mMACHINE® T7 Ultra 試劑盒的優(yōu)勢(shì)：

•從體外轉(zhuǎn)錄的 RNA 合成更多蛋白
•可在體外和體內(nèi)更高效地表達(dá) RNA 轉(zhuǎn)錄本
•使用隨附的多聚腺苷酸尾試劑穩(wěn)定體內(nèi)轉(zhuǎn)錄本

ARCA 加帽 RNA 更具有翻譯活性
ARCA 中的堿基修飾導(dǎo)致其僅以功能性、可翻譯的方向摻入；而傳統(tǒng)帽類(lèi)似物被摻入的方向有功能性和非功能性?xún)蓚€(gè)方向。因此，將 ARCA 摻入到轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中會(huì)產(chǎn)生 99% 可翻譯的加帽 RNA。在 mMESSAGE mMACHINE® T7 Ultra 轉(zhuǎn)錄本中加入了多聚腺苷酸尾，這進(jìn)一步得到了加強(qiáng)。對(duì)比 ARCA 和 ARCA/多聚腺苷酸尾轉(zhuǎn)錄本與帽類(lèi)似物和帽類(lèi)似物/多聚腺苷酸尾轉(zhuǎn)錄本的實(shí)驗(yàn)表明，使用 ARCA 加帽 RNA 時(shí)蛋白合成水平更高。

什么是 ARCA？
ARCA 是一個(gè)經(jīng)過(guò)修飾的帽類(lèi)似物，其中 3' OH 基團(tuán)（接近 m⁷G）被 OCH₃ 替換（參見(jiàn)示意圖）。由于該取代，RNA 聚合酶只能使用剩余的羥基團(tuán)啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄，迫使 ARCA 以正向摻入。因此，5' 端與 ARCA 合成的轉(zhuǎn)錄本 99% 可翻譯，導(dǎo)致對(duì)翻譯產(chǎn)生強(qiáng)刺激性效應(yīng)。

對(duì)體外轉(zhuǎn)錄 RNA 進(jìn)行正確加帽
對(duì) RNA 進(jìn)行正確加帽可促進(jìn)蛋白合成的正確啟動(dòng)，以及體內(nèi) mRNA 的穩(wěn)定性和加工。無(wú)帽 RNA 在顯微注射或轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中后會(huì)被細(xì)胞 RNase 快速降解。加帽 RNA 通常能在體外翻譯系統(tǒng)中更高效地翻譯，生成了具有僅以功能性方向摻入的帽類(lèi)似物的 RNA。因此，用ARCA取代傳統(tǒng)的帽類(lèi)似物能保證合成 99% 可翻譯的加帽 RNA。

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