小鼠抗中性粒細胞胞漿抗體（甲醛固定）（pANCA） ELISA kit
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廣州健侖生物科技有限公司
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漢坦病毒抗體試劑盒
漢坦病毒抗體診斷試劑盒
| 健侖生物 | EL1600G | 漢坦病毒IgG檢測試劑盒 | 用于流行性出血熱（EHF）病人血清中抗?jié)h坦病毒IgG定性檢測。 | 96T/盒 | CE |
| 健侖生物 | EL1600M | 漢坦病毒IgM檢測試劑盒 | 用于流行性出血熱（EHF）病人血清中抗?jié)h坦病毒IgM的定性檢測。 | 96T/盒 | CE |
【】
預期用途
此酶免試劑盒可用于流行性出血熱（EHF）病人血清中抗?jié)h坦病毒IgG和IgM的定性檢測。
人流行性出血熱（EHF）檢測試劑盒。人流行性出血熱（EHF）檢測試劑盒。人流行性出血熱（EHF）檢測試劑盒。
前言簡介
流行性出血熱（EHF）又稱腎病綜合征出血熱（HFRS），是由漢坦病毒（Hantaan type）引起的。與流行性腎病相比（因近距離接觸普馬拉病毒而被傳染），HFRS的傳染性更嚴重，一般都會伴隨有尿毒癥、呼吸麻痹和伴隨有典型休克綜合癥的出血，甚至死亡。這種疾病起初的癥狀是流行性感冒樣癥狀。HFRS起初的典型癥狀是血小板減少癥和白細胞增多癥。漢坦病毒主要分布于亞洲和巴爾干各邦地區(qū)，通過直接接觸嚙齒動物、嚙齒動物的排泄物或分泌物而傳染給人。士兵、農民和露營者都特別容易受到危險。
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實驗原理
包被孔中包被了重組的漢灘型漢坦病毒核殼體蛋白。在檢測IgM抗體時，為了避免由IgG抗體或類風濕因子引起的非特異性因素的干擾，病人血清必須與類風濕因子IgG吸附劑一起孵育。
實驗過程孵育期間，抗重組漢坦病毒抗原的特異性抗體會結合到固相包被板上。洗板后，我們分別用過氧化酶標記的抗人IgG和IgM抗體檢測特異性的IgG和IgM。加入底物液后顯色，溶液所顯示的顏色強度與結合的抗體量成正比。之后用酶標儀讀取OD值。
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貯存及穩(wěn)定性
試劑盒應當在2~8℃運輸和儲存，避免高溫和陽光直射，沒有打開的試劑能保存到有效期。包被條在封閉的袋子內2~8℃能保存到有效期。準備好的試劑的儲存及其穩(wěn)定性在相應章節(jié)已闡明。
開封的微孔板密封放置2-8℃下可保存至有效期
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樣品采集和貯存
人血清
注意靜脈穿刺采集全血的常規(guī)注意事項。從采集到血液樣品的那一刻起到檢測時都應保持血液樣品的 化學整體性。不要使用明顯溶血、黃疸的和脂血樣品。如果樣品出現混濁，則在實驗前應當離心以除 去所有的微粒物質。此試驗要采用人血清樣本 | |||
儲存 | 2-8℃ | ≤-20℃ | 避免熱源和太陽直射，避免反復凍溶。 |
穩(wěn)定性 | 5天 | 12mon | |
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試劑盒成分
規(guī)格 | 符號 | 成分 |
1 x 12 x 8 | MTP | 微孔反應板 |
1 x 750 µL | ANTI IgG CONJ CONC | 酶聯物（20倍濃縮） |
1 x 750 µL | ANTI IgM CONJ CONC | 酶聯物（20倍濃縮） |
1 x 1.5 mL | CONTROL + IgG | 陽性質控IgG |
1 x 1.5 mL | REFCONTROL IgG | 參考對照質控IgG |
1 x 1.5 mL | CONTROL + IgM | 陽性質控IgM |
1 x 15 mL | DILBUF CONC | 樣品稀釋緩沖液（20倍濃縮） |
1 x 1.5 mL | REFCONTROL IgM | 參考對照質控IgM |
1 x 1.9 mL | CONTROL- | 陰性質控 |
1 x 100 mL | WASHBUF CONC | 洗滌液（10倍濃縮） |
1 x 1.5 mL | RE-AB | 類風濕因子吸附劑 |
1 x 12 mL | TMB SUBS | TMB底物液 |
1 x 12 mL | TMB STOP | TMB終止液 |
1 x | FOIL | 膠粘薄膜 |
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實驗做需器材但試劑盒沒提供
· 精確微移液管 體積（5; 20; 50; 100; 200; 1000 µL）
· 渦旋混合器
· 保溫箱, 37°C
· 試管（用于樣品稀釋）
· 8道微量移液器
· 洗瓶,自動或半自動洗板機
· 酶標儀
· 雙蒸水或去離子水
· 吸水紙,吸嘴,計時器
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實驗前準備
實驗前將試劑盒平衡至室溫（18-25°C）.含結晶的緩沖濃縮液可在37°C下迅速將其溶解.實驗前將其冷卻至至室溫（18-25°C）
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稀釋濃宿成分的準備（以測32孔為例）
提示:實驗前取所需量試劑,并迅速用于稀釋.
濃縮液 | 組分 | 體積 | 稀釋液 | 比例 | 備注 | 存儲 | 穩(wěn)定性 |
3mL | DILBUF CONC | 57mL | 去離子水 | 1:20 | 充分混勻 | 2-8°C | 1周 |
10 mL | WASHBUF CONC | 90 mL | 去離子水 | 1:10 | 充分混勻 | 2-8°C | 8周 |
200 µL | ANTI IgG CONJ CONC | 3.8 mL | 稀釋洗滌液 | 1:20 | 充分混勻 | - | 實驗結束后倒掉 |
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樣品稀釋
| 稀釋 |
| 比例 | 備注 |
| 穩(wěn)定性 |
IgG樣品 | 常規(guī) | 稀釋樣品稀釋液 | 1:201 | 10 µL+2000 µL | 2-8°C | 6周 |
IgM樣品 | 常規(guī) | 稀釋樣品稀釋液 | 1:201 | 10 µL+2000 µL | 2-8°C | 6周 |
提示:未稀釋樣品可于-20°C下保持數月
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實驗步驟
1將100μl即用型陽性質控、陰性質控、參考對照質控和稀釋血清樣品（如是IgM樣品,需用類風濕因子吸附劑前處理）加入到相應的微孔中。
2膠粘薄膜蓋板，37℃下溫育45分鐘。
3移除膠粘薄膜, 棄除孔內反應液.每孔加入300μl稀釋洗滌液，重復洗板4次，在吸水紙上拍干去除殘留液滴。
4每孔中加入100μl稀釋酶聯物（IgG 或IgM）
5膠粘薄膜蓋板。37℃下溫育45分鐘.
6移除膠粘薄膜, 棄除孔內反應液.每孔加入300μl稀釋洗滌液，重復洗板4次，在吸水紙上拍干去除殘留液滴。
7加底物液和終止液,建議用8道微移液器,保證加液相等的時間間隔。避免產生氣泡。
8每孔中加入100μl TMB底物液
9室溫（18-25°C）溫育10分鐘
10每孔中加入100μl終止液終止底物液反應。
1120分鐘內于酶標儀450nm處讀取OD值。（參考波長：650nm）
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8、結果計算
用病人樣品的OD值比上參考對照質控的OD值計算檢驗結果
A病人樣品/ A參考對照質控= Q
· IgG抗體：
Q＜1 | 陰性：沒有檢測到抗?jié)h灘型漢坦病毒IgG抗體 |
1≤Q≤1.5 | 可疑灰色區(qū)域，不能明確說明結果，10天之后應當對疾病的病程進行再次檢測。如果疑似病人感染了漢坦病毒，我們建議您對檢測的樣品也檢測下漢灘病毒（Hantaan）IgM抗體或檢測下普馬拉（Puumala）病毒抗體。 |
Q＞1.5 | 陽性：檢測到抗?jié)h灘病毒特異性IgG抗體 |
人流行性出血熱（EHF）檢測試劑盒。人流行性出血熱（EHF）檢測試劑盒。人流行性出血熱（EHF）檢測試劑盒。
· IgM抗體：
Q＜1 | 陰性：沒有檢測到抗?jié)h灘型漢坦病毒IgM抗體 |
1≤Q≤2 | 可疑灰色區(qū)域，不能明確說明結果，10天之后應當對疾病的病程進行再次檢測。如果疑似病人感染了漢灘病毒，我們建議您對檢測的樣品也檢測下普馬拉病毒（Puumala）抗體。 |
Q＞2 | 陽性：檢測到抗?jié)h坦病毒特異性IgM抗體 |
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本譯文由廣州健侖生物科技有限公司技術人員編譯，僅供參考，請以英文原版說明書為準或與我們公司工作人員！
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漢坦病毒現狀
腎綜合征出血熱（以下簡稱出血熱）是由漢坦病毒引起的一種自然疫源性疾病，是《中華人民共和國傳染病防治法》規(guī)定的乙類傳染病。
我國每年腎綜合征出血熱發(fā)病人數占世界報道的漢坦病毒感染病例的90%以上，是受漢坦病毒危害zui為嚴重的國家。我國大陸的31個省、市、自治區(qū)均有病例發(fā)生。我國年發(fā)病數zui高曾超過11萬，近十年來我國年報告發(fā)病人數一直在2～5萬左右，新疫區(qū)不斷出現，并時有暴發(fā)流行，老疫區(qū)的類型也有所變化。
因此，開展腎綜合征出血熱的流行病學監(jiān)測具有十分重要的意義，美國FOCUS公司進口原裝的腎綜合征出血熱ELISA試劑盒，已通過歐洲CE認證，可對出血熱調查及血清學檢測提供可靠的依據。
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