支原體污染：組織培養(yǎng)應(yīng)用中的關(guān)鍵問(wèn)題
何謂支原體?
作為一種非常之小的細(xì)菌，支原體的特點(diǎn)是沒(méi)有精密的細(xì)胞壁。此細(xì)胞壁缺失，導(dǎo)致有機(jī)體具有可塑性，使得支原體形狀具有高度的多變性，從球狀到分支長(zhǎng)絲狀均有呈現(xiàn)，且大小直徑從0.15到0.3µm之間不等。由于其可塑性，支原體可以通過(guò)0.2µm級(jí)（細(xì)菌截留）過(guò)濾器，此外，由于其細(xì)胞壁缺失，支原體能夠耐受某些阻礙細(xì)菌細(xì)胞壁合成的抗生素（譬如*）。
支原體為何應(yīng)當(dāng)受到我們的重視?
支原體是細(xì)胞培養(yǎng)中的常見(jiàn)污染物。由于其尺寸非常之小，且生長(zhǎng)速度較慢，利用常規(guī)實(shí)驗(yàn)室方法難以辨認(rèn)污染物。然而，對(duì)于任何受其感染的細(xì)胞培養(yǎng)，支原體都具有隱伏性的影響。譬如，包含一百萬(wàn)個(gè)哺乳動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)基，可被多達(dá)5億個(gè)支原體感染（Stanbridge，1981）。存在如此巨大數(shù)量的污染物，將會(huì)強(qiáng)烈地影響被感染宿主細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能，譬如：
- 改變細(xì)胞生長(zhǎng)速率
- 抑制或刺激細(xì)胞轉(zhuǎn)化
- 潛在有害的形態(tài)變異
- 改變DNA、RNA以及蛋白質(zhì)合成
- 改變酶作用
- 染色體異常
- 減少或增加病毒產(chǎn)量
- 耗盡生長(zhǎng)培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)成分
- 改變細(xì)胞表面抗原特性
- 降低腫瘤細(xì)胞的惡性
參考文獻(xiàn): Stanbridge, Eric J. “支原體檢測(cè)－獲得科學(xué)準(zhǔn)確性的必要手段' Israel J Med Sci 17: 563-568 （1981）.
鑒于支原體污染對(duì)于培養(yǎng)細(xì)胞的不利影響，顯而易見(jiàn)，對(duì)于任何源自受到支原體感染的細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)數(shù)據(jù)，其準(zhǔn)確性均有待置疑，并應(yīng)懷著謹(jǐn)慎和懷疑的態(tài)度處理這些數(shù)據(jù)（Stanbridge，1981）。
選用何種孔徑的濾膜，方能有效去除支原體?
利用0.1µm級(jí)過(guò)濾器，能夠截留支原體。Pall Life Sciences出品的0.1µm級(jí)Supor®濾膜，配備親水性本質(zhì)的聚醚砜濾膜，以去除支原體。Pall公司多種實(shí)驗(yàn)室過(guò)濾器產(chǎn)品中均整合了此濾膜，以作為組織和細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用的理想之選。
利用Pall公司0.1µm級(jí)濾膜，可以zui大程度地保障支原體不會(huì)藉由血清（或含有血清的介質(zhì)）導(dǎo)入培養(yǎng)基。
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