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更新時間：2023-01-13 14:07:08瀏覽次數(shù)：494次
聯(lián)系我時，請告知來自 環(huán)保在線隨著分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，原位雜交在分子病理和科學(xué)研究方面得到了日益廣泛的推廣和應(yīng)用。在原位雜交和FISH實驗中，變性溫度是至關(guān)重要的環(huán)節(jié)，也是確保原位雜交實驗成功的關(guān)鍵步驟。NatureGene ThermoBrite原位雜交儀可以根據(jù)實驗者的設(shè)置，自動完成變性和雜交過程。嚴(yán)格的溫度控制，適宜的濕度環(huán)境，加上低廉的成本，和時間上的節(jié)省，為分子水平的研究提供了可靠的保證。
NatureGene ThermoBrite 原位雜交儀
原位雜交儀的***
隨著分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，原位雜交在分子病理和科學(xué)研究方面得
到了日益廣泛的推廣和應(yīng)用。在原位雜交和FISH實驗中，變性溫度是至
關(guān)重要的環(huán)節(jié)，也是確保實驗成功的關(guān)鍵步驟。原位雜交儀可以根據(jù)實驗
者的設(shè)置，自動完成變性和雜交過程。嚴(yán)格的溫度控制，適宜的濕度環(huán)
境，加上低廉的成本，和時間上的節(jié)省，為分子水平的研究提供了可靠的
保證。
StatSpin ThermoBrite®系統(tǒng)ThermoBrite 原位雜交儀一次可處理12張玻片。
全密封式上蓋設(shè)計保證了理想的溫度和濕度，系統(tǒng)保證了高度的溫度均一
性，使得所有玻片溫差上下不超過℃。玻片很容易用手取出或放入。利
用數(shù)字觸碰面板可以簡單快速的編輯40個用戶定義方案和3種操作模式：
變性／雜交、雜交和固定溫度。
ThermoBrite 原位雜交儀是自然基因科技總代理產(chǎn)品，常年現(xiàn)貨供應(yīng)。
一次可進(jìn)行12張切片的實驗
·反應(yīng)艙密封禁閉，溫度適宜
·**的溫控，溫室均勻一致
·三種固定運行模式
·四十種自定義編輯程序
·數(shù)字鍵盤操作，方便易行
ThermoBrite是原位雜交領(lǐng)域的**者，ThermoBrite 原位雜交儀上等的性能在廣大原位雜交用戶中得到好評。
嚴(yán)格溫度控制
· 溫差在設(shè)定溫度±1℃
· 的溫度均一性
· 不受切片數(shù)量影響
· 理想的溫度控制
簡單程序設(shè)置
· 40種使用者自定義的程序
· 3種已設(shè)置運行模式
· 顯示屏隨時顯示實驗條件，實驗過程一目了然
方便操作使用
· 玻片取放容易，開蓋即可操作
· 全部實驗自動化
· 數(shù)字鍵盤，使用方便
系統(tǒng)指標(biāo)：
1. Barese Cecilia, Pech Nancy, Dircheri Sara, Meyers Justin, Sinn Anthony L., Yoder Mervin C., GoebeScott, Dinauer Mary C. "Granulocyte Colony-Stimulating Factor Prior to Nonmyeloablative Irradiation Decreases Murine Host Hematopoietic Stem CelFunction and Increases Engraftment of Donor Marrow Cells" The Stem CelNiche, March 2007; doi: 10. 1634/stemcell. 2006-0808.
2. Kim Sungjin, Song Yun-Jeong, Higuchi DarryA., Kang Hyunseok P., Pratt Jennifer R., Yang Liping, Hong Caron M., Poursine-Laurent Jennifer, Iizuka Koho, French Anthony R., Sunwoo John B., Ishii Shunsuke, Reimold Andreas M., and Yokoyama Wayne M. "Arrested NaturaKiller CelDevelopment Associated with Transgene Insertion into the Atf2 Locus" Blood, Feb 2006; 107: 1024-1030
附錄：關(guān)于HER2(轉(zhuǎn))
HER2是一種位于乳腺和乳腺癌細(xì)胞表面的受體，能夠控制癌細(xì)胞的生長、浸潤和癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移，大約20%的乳腺癌病例中HER2基因和/或蛋白水平增加，這些HER2陽性的腫瘤是一種高危腫瘤，對某些常規(guī)的和****反應(yīng)性差，通常預(yù)后不好。為此，多種阻斷HER2的****相繼問世，其中目前*為常用并經(jīng)FDA批準(zhǔn)的此類**是（赫賽汀），適用于**HER2過度表達(dá)的乳腺癌。由于這種**只有針對HER2基因擴增和蛋白過度表達(dá)的病人才有效，因此準(zhǔn)確評價HER2基因和蛋白水平是至關(guān)重要的。
FDA已經(jīng)批準(zhǔn)的檢測方式為**組化（IHC）和熒光原位雜交方法（FISH），顯色原位雜交方法（CISH）也已申報FDA等待批準(zhǔn)。由于CISH與FISH方法相比具有符合率高、成本低、標(biāo)本可長期保存等特點，目前被國內(nèi)外許多檢測機構(gòu)采用。作為篩查病人是否使用赫賽汀的手段，上述方法經(jīng)過國內(nèi)外臨床的實踐檢驗證明是可行的。但是，還有近1/4的病人由于檢測結(jié)果不準(zhǔn)確而接受了不當(dāng)?shù)?*。美國有一項調(diào)查顯示，IHC檢測HER2蛋白過表達(dá)的錯誤陽性率平均為18%，F(xiàn)ISH檢測HER2基因擴增的錯誤率在13%，造成這種情況的原因是多方面的，盡管很多實驗室也在使用FDA批準(zhǔn)的檢測試劑盒，但是近半數(shù)的實驗室所使用的方法都會或多或少與FDA批準(zhǔn)的步驟有所不同，比較集中的表現(xiàn)在兩個環(huán)節(jié)：（1）許多實驗室未使用中性福爾馬林固定，市場上商品化的各種固定劑名目繁多，由于磚利等方面的原因，我們實際并不知道真實成分（2）新型自動化設(shè)備對組織進(jìn)行快速處理，其所使用的磚利固定劑和快速的組織處理時間都和以往有所不同，所以參照FDA認(rèn)可的方法對現(xiàn)有方法進(jìn)行比對就變得十分必要?？紤]到**需要昂貴的費用和**本身所具有的毒副作用（主要是心臟），美國臨床腫瘤協(xié)會（ASCO）和美國病理家協(xié)會（CAP）近期聯(lián)合制定了乳腺癌HER2臨床檢測指南，并發(fā)表在2007年1月的協(xié)會期刊上，對HER2檢測所涉及的有關(guān)問題重新進(jìn)行了定義和規(guī)范，其中某些內(nèi)容已被FDA接受并即將實施。
專家組成員一致強調(diào)的HER2執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)部分如下：
1.檢測僅應(yīng)該針對浸潤性乳腺癌或乳腺癌的浸潤性部分
2.組織處理的條件必須標(biāo)準(zhǔn)化，固定液為10%中性緩沖福爾馬林，固定時間是6-48小時，并且上述條件需在病理報告中標(biāo)注
3.在下列情況下，對HER2**組化和熒光原位雜交結(jié)果難以作出正確的評判：
v HER2**組化判定排除標(biāo)準(zhǔn)
（1）組織固定沒有使用中性緩沖福爾馬林
（2）針吸標(biāo)本在中性緩沖福爾馬林固定液中固定少于1小時
（3）手術(shù)切除標(biāo)本在中性緩沖福爾馬林固定液中固定少于6小時或超過48小時
（4）具有邊緣收縮或擠壓人工假象的穿刺標(biāo)本
（5）在內(nèi)部正常導(dǎo)管或小葉具有很強的膜染色的組織
（6）對照組呈現(xiàn)非預(yù)想結(jié)果時
v HER2熒光原位雜交排除標(biāo)準(zhǔn)
（1）浸潤性乳腺癌細(xì)胞數(shù)量少難以在UV光下界定的樣品
（2）沒有使用中性緩沖福爾馬林固定組織
（3）組織固定時間過長（超過48小時）
（4）對照組呈現(xiàn)非預(yù)想結(jié)果
（5）FISH信號不均一（一致性<75%）
（6）出現(xiàn)背景彌散信號（>10%信號位于細(xì)胞漿）
（7）不合適的酶消化（核分辨不清、持續(xù)性自發(fā)熒光）
4.所采用的試驗步驟必須經(jīng)過試驗證實可靠，新試驗結(jié)果需和經(jīng)認(rèn)證的可靠的試驗結(jié)果符合率在95%以上
5.檢測步驟必須標(biāo)準(zhǔn)化，任何改動必須和原標(biāo)準(zhǔn)化步驟進(jìn)行校正，專家組認(rèn)為自動化染色平臺要優(yōu)于人工操作，后者需要定期進(jìn)行自檢
6.每次試驗需設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)對照，對照可以是細(xì)胞系或已知蛋白和基因表達(dá)情況的腫瘤組織，如果對照沒有出現(xiàn)預(yù)期結(jié)果，則不能對結(jié)果做出判定
7.應(yīng)用計算機圖像分析有益于結(jié)果的判定，但圖像分析系統(tǒng)需經(jīng)過標(biāo)準(zhǔn)化確認(rèn)，結(jié)果仍需病理學(xué)家確認(rèn)
8.HER2各種檢測結(jié)果的評判標(biāo)準(zhǔn)必須標(biāo)準(zhǔn)化，依據(jù)*新的臨床結(jié)果和各國所積累的經(jīng)驗，評判標(biāo)準(zhǔn)還需要重新定義
v HER2**組化判定標(biāo)準(zhǔn)
（1）檢查對照標(biāo)本，如果不是預(yù)期結(jié)果，試驗需重復(fù)
（2）陽性結(jié)果需超過30%的腫瘤細(xì)胞呈現(xiàn)完整的細(xì)胞膜染色方可判定
（3）必須可見均一的強細(xì)胞膜完整染色
（4）忽略不完整或淺的細(xì)胞膜染色
（5）對于弱的細(xì)胞膜染色病例（1-2+）推薦使用定量圖像分析
（6）如果細(xì)胞漿染色遮蓋了細(xì)胞膜染色，需重復(fù)試驗或進(jìn)行FISH
（7）如果正常導(dǎo)管或小葉呈現(xiàn)確定的染色，應(yīng)棄去標(biāo)本
（8）如果存在模糊的人工假象，應(yīng)棄去標(biāo)本
（9）避免判定導(dǎo)管內(nèi)癌（DCIS），僅能對浸潤性導(dǎo)管癌進(jìn)行打分
v HER2熒光原位雜交判定標(biāo)準(zhǔn)
（1）復(fù)習(xí)相應(yīng)的HE和**組化片，以確定浸潤性癌細(xì)胞所在的位置，原位癌不應(yīng)加以評判
（2）檢查對照標(biāo)本，如果不是預(yù)期結(jié)果，試驗需重復(fù)
（3）在兩個獨立的浸潤癌部分至少檢測20個非重疊的細(xì)胞
（4）如果信號是非均一的（>25%），應(yīng)棄去標(biāo)本
（5）如果自發(fā)熒光很強或細(xì)胞核分辨差，應(yīng)棄去標(biāo)本
（6）如果背景染色影響信號的評判（>10%位于細(xì)胞漿）
（7）如果HER2/CEP17比值在1.8~2.2之間，需其他人重復(fù)計算
（8）如果是非均一性表達(dá)，需其他人重新計算
（9）可由經(jīng)過培訓(xùn)的技術(shù)人員計算結(jié)果，但是需經(jīng)病理醫(yī)生確認(rèn)結(jié)果是否準(zhǔn)確，采樣是否位于浸潤性腫瘤細(xì)胞
9.HER2檢測報告必須標(biāo)準(zhǔn)化
另外，專家組還對于開展上述檢測的實驗室標(biāo)本檢測數(shù)量進(jìn)行了規(guī)定，如果每年檢測數(shù)量很低，那么就不能保證結(jié)果的可靠性。
這份新的HER2檢測指南一經(jīng)問世，就在美國病理學(xué)界引起了巨大的反響。起草指南的專家組主席Hammond認(rèn)為新指南向病理學(xué)家傳遞了兩方面重要的信息：
1.對有關(guān)“陽性"、“可疑"和“陰性"結(jié)果的定義進(jìn)行了重新修訂，牽涉到IHC和FISH兩種方法，同時對兩種方法的判定排除標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了詳盡的說明。每一種試驗都包括三種結(jié)果，即陽性、可疑和陰性?！瓣栃?定義為3+表達(dá)（IHC）和HER2基因/CEP17的比值大于2.2（FISH）“可疑"定義為2+表達(dá)（IHC）和HER2基因/CEP17的比值是1.8-2.2（FISH）“陰性"定義為0或1+表達(dá)（IHC）和HER2基因/CEP17的比值小于1.8-2.2（FISH），如果沒有17號染色體作為內(nèi)對照，上述三種情況所對應(yīng)的HER2基因拷貝數(shù)分別為>6、4~6和<4。對于可疑的IHC結(jié)果，必須進(jìn)行基因擴增的檢測對于可疑的FISH結(jié)果，可以重新計算切片中其它部位的細(xì)胞擴增數(shù)或重新檢測IHC。對于三種情況的定義，修改*大的是IHC3+需要大于30%的腫瘤細(xì)胞呈現(xiàn)強的、完整的細(xì)胞膜著色，而不是先前FDA定義的大于10%的腫瘤細(xì)胞（FDA已經(jīng)接受了這種修改）。
2.強調(diào)HER2檢測質(zhì)量保證體系的必要性并提出相應(yīng)的具體措施。新指南指出現(xiàn)存的HER2檢測質(zhì)量認(rèn)證體系存在許多問題，必須予以強化并提出具體的方法，包括強制相應(yīng)的檢測機構(gòu)參加質(zhì)量評定工作（目前美國只有25%~30%的實驗室參加）、使用已知基因擴增和蛋白表達(dá)情況的組織芯片（至少包括200例乳腺癌）、*終符合率要達(dá)到90%以上、每年至少檢測兩次（包括20個IHC和80個FISH標(biāo)本）等，如果達(dá)不到要求，可以停止其檢測資格，當(dāng)然這些措施會逐步實施，F(xiàn)DA已經(jīng)同意逐步開展這項工作。
PhenoPath Laboratories的**病理學(xué)家Allen M.Gown認(rèn)為新指南邁出了一大步，主要表現(xiàn)在兩個方面，一是促使病理學(xué)家和腫瘤學(xué)家相互合作，盡管這種必要性人人皆知，但是新指南為這種合作提供了一種程式化的模式二是指出HER2檢測的*大影響因素在于試驗前期的各項工作，其中*為重要的影響因素是固定，病理學(xué)家今后也需要關(guān)注一下標(biāo)本的固定方式和固定時間，這不僅僅是為了獲得滿意的HER2檢測結(jié)果，同時對其它病理科所檢測的各項指標(biāo)都非常有益，比如*常檢測的ER也會因為固定的問題（6小時是所需要的*短的固定時間）而影響到檢測結(jié)果。
關(guān)于我們：
美國Iris Sample Processing 原名STATSPIN,是專業(yè)于樣品處理設(shè)備研發(fā)制造商，其產(chǎn)品能簡化和加速樣品處理過程，大大提高實驗室效率。其產(chǎn)品廣泛應(yīng)用于世界各地的醫(yī)院, 實驗室, 診所, 病房實驗室和獸醫(yī)實驗室。
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快速、高效、環(huán)保的原位雜交儀 ThermoBrite
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